苏平安
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
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- κ-卡拉胶酶CgkX高效重组表达菌株的构建和发酵优化被引量：4
- 2015年
- 目的 CgkX是1种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,但产量低。本文旨在构建多种重组表达菌株,并进行发酵条件优化,以提高κ-卡拉胶酶CgkX的产量。方法在分析了κ-卡拉胶酶CgkX基因序列中稀有密码子和氨基酸序列中含硫氨基酸的基础上,构建多种CgkX表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达和酶活测定,筛选其中最高效的表达菌株,并对发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素进行优化。结果构建了4种重组表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),发现E.coli BL21(DE3)/pET-22b-CgkX酶产量最高,是以前菌株的5.5倍。通过优化确定了最佳发酵条件为:发酵起始pH 7.5,IPTG浓度为0.05mmol·L-1,诱导温度20℃,装液量为75mL,甘氨酸浓度为1g·L-1。优化后酶产量达到32.1U/mL,是优化前的7.1倍。结论经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX产量提高到最初的39.1倍,为酶解制备κ-卡拉胶寡糖提供了足量的工具酶。
- 苏平安王莹李尚勇于文功韩峰
- 关键词：发酵优化
