王莹
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划海洋公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 海洋弧菌QY105中褐藻胶寡糖酶OalA的基因克隆、重组表达与性质研究被引量：2
- 2016年
- 目的褐藻胶寡糖酶可将褐藻胶多糖和寡糖降解为单糖,但现有的褐藻胶寡糖酶数量极少且活力较差。本文旨在从海洋弧菌QY105中克隆寡糖酶OalA的编码基因,重组表达并研究其酶学性质。方法利用简并PCR和SiteFinding-PCR从海洋弧菌QY105中克隆得到褐藻胶寡糖酶OalA的编码基因,在大肠杆菌中进行重组表达,对重组酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果褐藻胶寡糖酶OalA基因全长2082bp,编码1条含有693个氨基酸残基的多肽链,理论分子量为79.17kDa,理论等电点为4.98,属于多糖裂解酶第15家族(PL^(-1)5)。重组OalA比活力为9.2U·mg^(-1),最适温度30℃,在10℃的酶活力达到最高酶活的45%,最适pH7.6,在低于30℃和pH6~10范围内稳定,偏好降解polyM。结论OalA具有低温酶的特点,且对polyM具有偏好性,可用于褐藻胶单糖制备、PL^(-1)5家族结构与功能相互关系研究等领域。
- 王莹张兰王亚楚艺于文功韩峰
- 关键词：褐藻胶弧菌
- κ-卡拉胶酶CgkX高效重组表达菌株的构建和发酵优化被引量：4
- 2015年
- 目的 CgkX是1种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,但产量低。本文旨在构建多种重组表达菌株,并进行发酵条件优化,以提高κ-卡拉胶酶CgkX的产量。方法在分析了κ-卡拉胶酶CgkX基因序列中稀有密码子和氨基酸序列中含硫氨基酸的基础上,构建多种CgkX表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达和酶活测定,筛选其中最高效的表达菌株,并对发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素进行优化。结果构建了4种重组表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),发现E.coli BL21(DE3)/pET-22b-CgkX酶产量最高,是以前菌株的5.5倍。通过优化确定了最佳发酵条件为:发酵起始pH 7.5,IPTG浓度为0.05mmol·L-1,诱导温度20℃,装液量为75mL,甘氨酸浓度为1g·L-1。优化后酶产量达到32.1U/mL,是优化前的7.1倍。结论经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX产量提高到最初的39.1倍,为酶解制备κ-卡拉胶寡糖提供了足量的工具酶。
- 苏平安王莹李尚勇于文功韩峰
- 关键词：发酵优化
