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郑晓江
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
集美大学生物工程学院
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发文基金:
福建省科技重大专项
国家自然科学基金
福建省自然科学基金
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相关领域:
农业科学
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合作作者
王慈
集美大学生物工程学院
蔡秋凤
集美大学生物工程学院
曹敏杰
集美大学生物工程学院
刘光明
集美大学生物工程学院
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蔡秋凤
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王慈
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郑晓江
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中国水产科学
年份
1篇
2014
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鲢小清蛋白的cDNA克隆及在大肠杆菌中的原核表达
被引量:1
2014年
以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉cDNA为模板,利用小清蛋白特异性引物进行PCR扩增,克隆得到β小清蛋白两种不同亚型,即Ⅰ型、Ⅱ型编码区基因。将目的基因片段连接到pET28a(+)表达载体,并在大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)]中诱导表达。结果表明,经诱导的小清蛋白重组质粒菌株有特异的蛋白表达。SDS-PAGE分析显示,目的蛋白的分子量约为13 kD,与预期大小一致。菌体超声破碎后发现2种亚型的小清蛋白均为可溶表达。利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ。经Western Blot鉴定,重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ均能与抗鲢小清蛋白单克隆抗体反应。本研究为进一步分析小清蛋白的结构与致敏性的关系提供了重要的基础。
王慈
曹敏杰
郑晓江
詹春兰
刘光明
蔡秋凤
关键词:
小清蛋白
CDNA克隆
原核表达
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