郑雪萍
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中山大学药学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自噬相关蛋白ATG4B抑制剂的虚拟筛选及体外活性测定被引量：2
- 2017年
- 目的通过计算机虚拟筛选和体外活性测定,筛选自噬相关蛋白ATG4B的特异性小分子抑制剂。方法基于ATG4B蛋白的晶体结构(PDB ID:2CY7)找出合适的对接口袋;用分子对接方法对SPECS数据库20万化合物进行虚拟筛选并确定候选化合物;用荧光共振能量转移方法(FRET)检测候选化合物对ATG4B的体外抑制活性并对其特异性进行验证。结果确定受体蛋白2CY7的site 5为最适的对接口袋;分子对接后经综合分析选择并购买30个代表性化合物做进一步活性测定。活性测定结果显示,AG-690/10400046能有效抑制ATG4B蛋白的活性,而对半胱氨酸蛋白酶家族的另一成员caspase-3无酶切抑制作用。结论建立了一种ATG4B蛋白抑制剂的虚拟筛选方法。筛选得到的化合物AG-690/10400046具有明显的体外抑制活性,为后续ATG4B抑制剂的生理功能研究奠定基础。
- 伏园园吴一诺喻秀郭讷张仁伟刘翠郑雪萍戴琪刘培庆李民
- 关键词：抑制剂分子对接自噬
- 以GLP-1受体为靶点的药物筛选模型的建立及功能鉴定被引量：5
- 2017年
- 目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,经G418压力筛选后获得稳定表达GLP-1R-GFP的293A细胞株,然后通过GFP荧光信号和Western blot检测GLP-1R-GFP融合蛋白在该细胞中的表达与分布;最后利用GLP-1类似物利拉鲁肽刺激细胞,均相时间分辨荧光法检测细胞内cAMP含量变化。结果成功构建了GLP-1R-GFP-293A稳转细胞株,GLP-1RGFP蛋白主要分布在细胞膜表面,该细胞对GLP-1类似物利拉鲁肽具有高灵敏度和产生cAMP的特异性反应。结论利用所构建的细胞模型,可对小分子和GLP-1类似物进行体外活性分析,为筛选GLP-1受体激动剂奠定了模型基础。
- 黎思彤郑雪萍杨学敏聂涛陈健文刘培庆李民
- 关键词：CAMP细胞模型融合蛋白
- 三白草中ATG4B抑制剂的发现及活性测定被引量：1
- 2019年
- 验证从三白草中提取的两个化合物XGN56和XGN59对自噬关键蛋白ATG4B酶活性的影响及对自噬的调节作用。分子对接的方法验证化合物与游离ATG4B及ATG4B-LC3复合体的氢键结合作用;SDS-PAGE法及荧光共振能量转移法(FRET)测定化合物(10μmol/L)抑制ATG4B的IC50值;LC3融合GFP荧光标签检测化合物(10μmol/L)对LC3荧光聚集的影响,并设置正常组、给药组和药物联用Baf(0.5μmol/L)组;过表达GFP-LC3的WT-MEF及ATG5-/--MEF细胞检测化合物诱导LC3荧光点的情况。结果显示,XGN56和XGN59能分别与游离ATG4B和ATG4B-LC3复合体形成氢键作用,且两者均能剂量依赖地抑制ATG4B的酶切活性,体外IC50分别为7.74μmol/L和8.00μmol/L,同时能够ATG5依赖地促进GFP标记的自噬体的生成(P<0.001)。结果表明,两个化合物可能是通过一定程度地抑制ATG4B的酶活性从而促进细胞自噬水平。
- 郑雪萍伏园园夏凡顾琼李民
- 关键词：三白草分子对接抑制剂自噬
