蒋明娟
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：四川大学华西公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省国际科技合作与交流研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌clpP2抗原表位预测与分析被引量：1
- 2017年
- 目的预测结核分枝杆菌酪蛋白酶蛋白水解亚基单位2(clpP2)的抗原表位,为结核病疫苗、药物研制等提供新的靶点。方法以clpP2蛋白的氨基酸序列为基础,采用生物信息软件DNA Star预测二级结构;运用SWISS-MODEL在线软件进行同源建模;运用VaxiPred软件综合预测T细胞抗原表位,用ABCpred、COBEPro和BepiPredPred软件综合预测其B细胞抗原表位;采用DNA Star Protean、SignalP、TMHMM在线软件和NCBI数据库分析其免疫学相关信息。结果 clpP2蛋白结构丰富,含有较多潜在细胞毒性T细胞和辅助T细胞表位;也含有较多的B细胞线性和构象优势表位,这些区域亲水性、表面可能性和柔韧性指数都较高。结论 clpP2蛋白具有诱导免疫应答的潜能,可以作为结核监测、治疗、预防的新靶点。
- 刘思静蒋明娟蒲启康任晨艳苏琳张祥汪川
- 关键词：结核分枝杆菌抗原表位
- 结核分枝杆菌Rv2660c蛋白结构分析及抗原表位预测被引量：1
- 2016年
- 目的分析结核分枝杆菌Rv2660c蛋白的结构并预测其抗原表位,为研发针对结核潜伏性感染的治疗性疫苗和药物提供新的靶点。方法用BLAST软件分析Rv2660c蛋白与人类蛋白的同源性,然后运用生物信息学方法预测其二级结构、跨膜结构、信号肽序列及T细胞和B细胞抗原表位。结果 BLAST结果显示,Rv2660c蛋白与人类蛋白同源性不高,同源性最高的人类蛋白是MAD 6蛋白,同源性仅为16%。Rv2660c蛋白无跨膜区,为胞外蛋白,不含信号肽序列;该蛋白含丰富的B细胞和T细胞抗原表位,19-35、48-54、28-44和58-73位氨基酸残基可能存在优势线性B细胞表位;56-64位和65-74位氨基酸可能存在优势辅助性T细胞表位,66-74、41-49、63-71位氨基酸可能存在优势细胞毒性T细胞表位。结论 Rv2660c蛋白含丰富抗原表位,具有较强的体液免疫和细胞免疫原性,可望作为潜伏性感染结核的治疗性疫苗和药物的作用靶点。
- 蒋明娟刘思静任晨艳蒲启康张祥苏琳汪川
- 关键词：结核分枝杆菌表位预测生物信息学
- 绵羊李斯特菌在小鼠体内的感染增殖规律及诱导的细胞因子分泌被引量：2
- 2016年
- 目的研究绵羊李斯特菌（Li）静脉接种和滴鼻接种C57BL／6J小鼠后，细菌在小鼠体内感染增殖规律及诱导的细胞免疫应答水平，为Li作为一种新型疫苗载体提供科学依据。方法采用寇氏法测定Li静脉接种和滴鼻接种C57BL／6J小鼠的半数致死剂量（LD50）；以0．1×LD50剂量静脉或滴鼻接种小鼠，测定不同时间点小鼠肝、脾和肺中的细菌载量、组织病理学改变，以及肝和脾组织匀浆液中IFN-γ肺组织匀浆液中IFN-γ、TNF-α和IL-6的含量。结果Li静脉接种和滴鼻接种小鼠的半数致死剂量分别为6．3×106（cfu）和2．5×108（cfu）。Li静脉感染小鼠后能够在肝、脾和肺中增殖，引起组织细胞坏死和炎性浸润并诱导IFN-γ泌水平上调，三种器官中肝的各指标变化最显著。“滴鼻感染小鼠后主要在肺部增殖，引起肺部病理损害并诱导肺组织IFN-γ、TNF-α和IL-6分泌水平上调。结论静脉接种Li可以在小鼠体内引起全身性多器官的病理和免疫反应，而滴鼻接种Li可以针对性地在小鼠肺部引起病理和免疫反应；Li可以作为一种新型疫苗载体。
- 周梦莹蒋明娟任晨艳刘思静蒲启康汪川
- 关键词：细胞因子
- 李斯特菌溶血素在疫苗研制中的应用进展被引量：2
- 2016年
- 李斯特菌溶血素(LLO)是胆固醇依赖的溶细胞毒素家族中的一个成孔毒素,是单增李斯特菌的主要毒力因子。国内外研究表明,LLO能帮助细菌逃离噬菌体、不产生细胞毒作用、促进外源性抗原提呈,以及刺激CD8^+T细胞免疫应答等,已在一些新型亚单位疫苗、DNA疫苗以及减毒活疫苗研制中得到了广泛的应用。本文将对LLO的结构与功能的关系、在致病过程中起的作用以及在疫苗研制中的应用的进展进行综述。
- 刘思静蒲启康蒋明娟汪川
- 关键词：李斯特菌溶血素疫苗
- 李斯特菌载体结核疫苗候选株基因重组构建及蛋白表达验证被引量：2
- 2016年
- 目的基因重组构建以单增李斯特菌、绵羊李斯特菌为载体的新型结核疫苗候选株,并进行蛋白表达验证,为结核疫苗研究和结核防控提供新思路和新方法。方法以体外基因连接、质粒转化等技术,将本实验室已有的分别编码结核抗原Ag85C、ESAT-6蛋白的两种基因盒,插入携带单增李斯特菌、绵羊李斯特菌同源序列的打靶质粒中。将打靶质粒电转化单增李斯特菌、绵羊李斯特菌,在42℃和30℃连续传代,利用同源重组杂交原理和基因打靶技术,将打靶质粒携带的两种编码结核抗原的抗原基因盒,分别整合至致病基因(actA和plcB)被敲除的单增李斯特菌、绵羊李斯特菌减毒株及未经减毒的绵羊李斯特菌基因组中。重组菌经蓝白斑、抗生素抗性及PCR筛选,再经Western blot检测其菌体蛋白及分泌蛋白的表达情况。结果构建了携带抗原基因盒的重组菌株5株,其重组基因序列PCR验证结果均符合预期,且测序验证成功;重组菌不携带红霉素抗性基因,表型特征符合预期;其中,重组菌Li-Rv0129c、Li-ΔactAplcB-Rv0129c按预期表达了结核杆菌Ag85C抗原蛋白,Li-ΔactAplcBRv3875按预期表达了结核杆菌ESAT-6抗原蛋白,Lm重组菌未表达相应结核抗原蛋白。结论成功构建并筛选得到3株以绵羊李斯特菌为载体的、携带结核杆菌Rv0129c(编码Ag85C)抗原基因盒或Rv3875(编码ESAT-6)抗原基因盒,且表达相应抗原蛋白的新型结核疫苗候选株。
- 任晨艳刘思静蒲启康蒋明娟周梦莹汪川
- 关键词：李斯特菌结核疫苗
- 表达绿色荧光蛋白的重组绵羊李斯特菌的构建及荧光分析
- 2017年
- 目的构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组绵羊李斯特菌,为绵羊李斯特菌的研究提供重要工具。方法利用SOEing PCR的方法将单核细胞增生性李斯特菌溶血素的启动子(phly)与GFP基因融合,连接到pCW质粒上,构建重组原核表达质粒pCW-phly-GFP。将重组质粒电转化绵羊李斯特菌,利用荧光显微镜分析荧光表达情况。分别在含红霉素和不含红霉素的BHI肉汤中连续传代培养携带重组质粒的绵羊李斯特菌,通过提取质粒和观察荧光的方法研究重组质粒pCW-phly-GFP及GFP在绵羊李斯特菌中的稳定性。结果重组质粒pCW-phly-GFP酶切验证和测序均正确。在荧光显微镜下可以见到携带重组质粒的绵羊李斯特菌发绿色荧光。在红霉素抗性压力选择下重组质粒pCW-phly-GFP能稳定存在于绵羊李斯特菌中,并高效表达GFP。结论成功构建了GFP基因原核表达质粒pCW-phly-GFP,能在绵羊李斯特菌中高效表达GFP,为进一步研究绵羊李斯特菌作为疫苗载体提供了重要的工具。
- 张祥苏琳刘思静李泳榆蒋明娟黄欢汪川
- 关键词：绿色荧光蛋白原核表达
