李金福
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅社会发展攻关项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猬迭宫绦虫裂头蚴感染小鼠皮下肌肉组织β1转化生长因子含量变化的观察
- 2017年
- 目的探讨β1转化生长因子(TGF-β1)在猬迭宫绦虫(Spirometra erinacei)裂头蚴感染小鼠皮下肌肉组中的表达情况及意义。方法对采自野生王锦蛇(Elaphe carinata)的裂头蚴进行形态学观察和PCR检测。昆明小鼠80只,用数字随机表法挑选40只,雌雄各半作为实验组,剩余40只为对照组。用蛇源裂头蚴经口喂饲实验组小鼠,5条/鼠。于喂饲后第7、14、28、56天各随机剖杀10只,分别收集含有裂头蚴寄生的皮下肌肉组织,用中性甲醛固定,制作石蜡切片。HE染色后,观察裂头蚴感染病灶周围的病理变化和纤维化程度;免疫组化检测皮下肌肉中TGF-β1的含量变化。对照组不喂饲裂头蚴,检测时间及方法同实验组。结果PCR扩增获得约400 bp的目的条带。测序结果显示,该裂头蚴COX1基因与Gen Bank中的猬迭宫绦虫序列一致性为99.12%。HE染色检查,皮下肌肉中的裂头蚴被炎性囊壁所包裹,虫体与囊壁之间形成穴腔,穴腔有时出现少许的浆液或血液。囊壁最里面的区域有薄层的纤维蛋白、坏死的碎片,壁中早期以中性粒细胞浸润为主,也有嗜酸粒细胞、巨噬细胞、浆细胞等,随着病程的进展,炎性囊壁逐渐扩大,壁中以慢性炎性细胞浸润为主,囊壁周围是宿主的组织细胞,纤维结缔组织增生明显,并有不同程度的纤维化。免疫组化检查结果显示,TGF-β1的主要表达部位为裂头蚴周围的炎症反应带和纤维结缔组织增生部位。TGF-β1相对表达量在感染后逐渐增高,于感染第28天达峰值(0.654 5±0.045 5),第56天时明显下降。在感染后第7~56天,实验组的TGF-β1水平为(0.502 6±0.008 2)^(0.346 8±0.030 4)与同期对照组的(0.270 0±0.001 6)^(0.274 0±0.005 1)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠感染猬迭宫绦虫裂头蚴早、中期,TGF-β1表达水平均提高,其免疫抑制作用不利于清除和控制皮下肌肉组织中的裂头蚴。
- 张勇李金福陈艳蔡倩彤
- 关键词：裂头蚴Β1转化生长因子HE染色
- 蛇源裂头蚴感染小鼠空肠免疫球蛋白A抗体分泌细胞数量及分泌型免疫球蛋白A水平观察
- 2017年
- 目的 观察蛇源裂头蚴感染小鼠诱导免疫球蛋白A（IgA）抗体分泌细胞（IgASCs）数量及分泌型IgA（sIgA）抗体应答水平，了解IgASCs及sIgA在抗裂头蚴入侵中的作用。方法 选取清洁级昆明小鼠100只，雌雄各半，体重为20 ~ 25 g，按体重采用随机数字表法分为对照组和实验组，每组50只。用蛇源裂头蚴喂饲实验组小鼠，每只喂5条；对照组不感染。分别于感染后1、7、14、28、56 d从2组中各取10只小鼠进行解剖，收集空肠液和空肠段组织。采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中IgASCs数量，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测空肠液sIgA水平。结果 IgASCs分布于空肠黏膜的固有层中，实验组IgASCs数量（以IgASCs阳性细胞率表示）于感染后1 d达到峰值［（64.24 ± 0.60）%］，随后下降，至感染后14 d［（41.98 ± 0.42）%］低于对照组［（43.52 ± 0.94）%，t = - 4.727，P 〈 0.01］。实验组sIgA水平于感染后7 d达到峰值［（22.05 ± 1.43）mg／L］，随后呈下降趋势，于感染后56 d［（21.26 ± 2.59）mg／L］与对照组［（20.00 ± 0.42）mg／L］比较差异无统计学意义（t = 1.516，P 〉 0.05）。实验组感染后7 d，空肠黏膜IgASCs数量与空肠液sIgA水平呈正相关（r = 0.663，P 〈 0.01），而在感染后14 d，二者呈负相关（r = - 0.542，P 〈 0.05）。结论 小鼠感染蛇源裂头蚴后，可诱导IgASCs高水平的表达及sIgA水平的升高，二者在感染后7 d呈正相关。
- 刘巧霞陈艳李金福蔡倩彤
- 关键词：裂头蚴病分泌型免疫球蛋白A
- 贵州省安顺地区蛇源裂头蚴分离株的分子鉴定及种系发育关系分析被引量：3
- 2016年
- 目的对贵州省安顺地区蛇源裂头蚴分离株进行分子鉴定及种系发育关系的分析。方法采集贵州安顺地区4种常见野生蛇（王锦蛇、乌梢蛇、黑眉锦蛇、灰鼠蛇）来源的裂头蚴,分别提取各裂头蚴基因组DNA,PCR扩增ITS1和cox1基因,所得PCR扩增产物经纯化并T-A克隆后测序。运用ClustalX1.81生物分析软件,将所得序列与GenBank所录迭宫属绦虫和其它属绦虫基因序列进行多重序列比对分析,并应用软件MEGA 6.0构建系统发育树（邻位连接法）。结果成功扩增出8株裂头蚴的ITS1和cox1基因序列,ITS1大小为822～863bp,cox1大小为404～415bp,与预期的基因片段大小一致。基于ITS1和cox1基因序列构建的种系发育树与所有的猬迭宫绦虫均构成同一亚群,总分支的自展值高于50%,二者在不同的分离株之间呈现基因多态性。对8株裂头蚴ITS1和cox1序列的同源性进行比较,ITS1的同源性为70.27%～82.84%,而cox1的同源性为95.63%～99.50%,显示cox1的同源性高于ITS1。已向GenBank提交ITS1和cox1新序列各一条,登录号分别为KF990161和KJ418421。结论贵州安顺地区不同蛇源裂头蚴分离株之间存在基因多态性。从总分支的自展值来看,cox1比ITS1更适合用于种内遗传多态性研究,ITS1适合做定种的分子标记。
- 李金福刘艳丹陈艳裘学丽
- 关键词：裂头蚴
- 猬裂头蚴27kD半胱氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及生物信息学分析被引量：1
- 2017年
- 目的克隆、表达猬裂头蚴27kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)基因,并分析其生物学特性。方法提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增27kDa半胱氨酸蛋白酶(27kDa CP)基因,克隆入pMD-19T载体,测序正确后将27kDa-CP基因亚克隆入表达载体pET-28a(+),构建pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒,转入大肠埃希菌Transetta(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白27kDa CP。用镍离子柱亲和层析法纯化目的蛋白。表达产物用SDS-PAGE及Western Blotting进行分析,并运用NCBI和ExPASy等有关的生物信息学分析工具,对27CP基因及其编码蛋白进行预测和分析。结果 CP基因序列的开放阅读框长为1 011bp,去除信号肽序列长954bp,登录到GenBank,获得登录号ANA52569。该基因编码一个含317个氨基酸的蛋白多肽,属于Peptidase_C39_like超家族,理论分子量约35 669.9Da,等电点5.92。pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒经IPTG诱导后,蛋白在大肠埃希菌中成功表达,经纯化后的蛋白利用Western blotting检测,证明与预期大小相符,且与猬裂头蚴感染阳性血清有较好的结合反应。结论成功克隆、表达了猬裂头蚴27kDa CP基因,获知CP基因及其编码的氨基酸序列和生物信息学。
- 焦梦涵刘艳丹陈艳李金福
- 关键词：裂头蚴原核表达生物信息学
- 4种试剂盒提取病理组织切片中裂头蚴DNA效果的比较被引量：1
- 2018年
- 目的筛选一种快速、简单、高效、价格合理的从病理组织切片中提取猬裂头蚴DNA的试剂盒。方法用4种不同的试剂盒提取病理组织切片(含虫白片/HE染色片)中裂头蚴DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率、提取时间、提取价格及PCR产物的亮度,评价4种市售商品试剂盒提取DNA的效果。结果 4种试剂盒提取裂头蚴有虫组织白片DNA的结果:试剂盒1提取DNA的浓度、纯度及提取率最高,提取成本也最高且耗时较短;试剂盒2的提取效果与试剂盒1相近,提取成本较低且时间最短;试剂盒3的提取效果介于试剂盒2与试剂盒4之间,成本最低但时间长达26h;试剂盒4提取效果最低,PCR产物条带也最暗,提取成本较低但耗时较长。4种试剂盒提取HE染色片DNA的结果:试剂盒1与试剂盒2提取的效果相近,两者成本较高耗时较短,试剂盒3与试剂盒4的提取效果相近,两者成本低耗时长,试剂盒3与试剂盒4的提取效果均低于试剂盒1和试剂盒2的提取效果。结论 4种商品试剂盒均能满足裂头蚴感染有虫组织的DNA提取,其中试剂盒2更适用于快速提取。
- 蒙兴慧陈艳李金福胡月刘巧霞刘鉴
- 关键词：DNA提取病理组织切片
- 媒介蚊虫抗病毒重要途径的研究进展
- 2020年
- 蚊虫是蚊媒病的重要传播媒介,可传播多种蚊媒病毒,如乙型脑炎病毒、登革热病毒和寨卡病毒等,对全球人类和动物健康构成巨大威胁,媒介蚊虫的防治仍然是限制蚊媒病毒传播的主要途径。了解蚊虫如何抵抗病毒感染,病毒如何在蚊虫体内持续稳定增殖,可为发展新的蚊虫控制策略提供新的理论基础。本文主要综述小RNA干扰(RNAi)和一些保守的固有免疫信号途径在蚊虫体内发挥抗病毒机制的相关研究进展。
- 朱春玲朱春玲李金福赵彤言
- 关键词：蚊虫RNAI固有免疫
- 虫种特异性基因检测小鼠无虫病理组织裂头蚴感染的可行性研究被引量：1
- 2018年
- 目的研究用细胞色素C氧化酶1基因(cox1)及内转录间隔区1(ITS-1)特异性序列检测小鼠无虫病理组织中裂头蚴感染的可行性。方法 6~8周龄昆明小鼠20只,采用随机抽签法分为感染组(15只)和未感染组(5只),感染组小鼠经口感染蛇源裂头蚴(5条/只),未感染组不作任何处理。感染后第14天剖杀小鼠,取感染组小鼠皮下含裂头蚴肌肉组织(含虫组织)、去除裂头蚴肌肉组织(无虫组织)及未感染组小鼠相应部位肌肉,制作组织切片,苏木精-伊红染色法(HE)染色后观察。用改良的蛋白酶K消化法提取未染色肌肉组织切片的DNA,PCR扩增cox1(2对引物,对应cox1-1和cox1-2片段)和ITS-1序列。选取从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1进行克隆并测序,与Gen Bank中猬裂头蚴序列(KJ418421、KF990161、GQ999947)进行比对。以猪囊尾蚴感染的小鼠肌肉组织同法制作切片并提取DNA,评价cox1和ITS-1 PCR扩增的特异性。结果感染组含虫组织DNA经1次PCR即可扩增出414 bp(cox1-1)、151 bp(cox1-2)、822 bp(ITS-1)的条带。感染组无虫组织DNA第1次PCR未扩增出条带,以第1次PCR产物为模板再次PCR,扩增出相同大小的3条条带。未感染组DNA第1次和第2次PCR均未扩增出条带。序列比对结果显示,从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1序列与KJ418421、KF990161、GQ999947序列的同源性分别为98.2%、99.1%、99.1%。猪囊尾蚴感染组织DNA没有扩增出条带。结论以cox1和ITS-1序列为靶序列进行重复PCR,能鉴定小鼠无虫病理组织裂头蚴感染。
- 胡月陈艳李金福蒙兴慧刘巧霞刘鉴
- 关键词：裂头蚴基因检测
