刘艳丹
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猬迭宫绦虫27ku半胱氨酸蛋白酶基因的表达模式研究
- 2016年
- 目的了解半胱氨酸蛋白酶(CP)基因在猬迭宫绦虫成虫及裂头蚴不同部位及裂头蚴不同感染时期的时空表达模式。方法收集安顺地区野生王锦蛇体内猬迭宫绦虫裂头蚴。将24只昆明小鼠随机分成8组,每组3只,以5条裂头蚴/只感染小鼠,于感染后30min^14d剖杀1组小鼠,收集感染小鼠体内的裂头蚴,以10条/只感染3只幼犬,于感染后1个月剖杀幼犬,收集成虫。利用实时定量PCR检测猬迭宫绦虫成虫和裂头蚴不同部位及不同感染时期裂头蚴CP基因的表达情况。结果小鼠经口感染裂头蚴30min后腹腔内查见穿过胃肠壁的裂头蚴;感染后30min^6h,裂头蚴主要见于胃肠腔、胃肠壁和腹腔内;感染24h,有少量的裂头蚴移行至小鼠皮下肌肉组织;感染7d后,多数裂头蚴移行至皮下肌肉组织寄生。实时荧光定量PCR检测CP基因在成虫及裂头蚴的不同部位均有表达,但成虫不同部位的表达量均低于幼虫时期。成虫不同部位的表达量依次为孕节>头节>成节,裂头蚴不同部位的表达量依次为体段>头段>尾段。裂头蚴感染小鼠30min时CP基因表达量下调,感染6h时达到峰值,随后下降,感染14d时降至最低。结论 CP基因在猬迭宫绦虫裂头蚴感染初期及裂头蚴体段和成虫孕节高表达,提示CP可能参与猬迭宫绦虫的生长、发育、入侵及移行等过程。
- 刘艳丹陈艳张勇
- 关键词：裂头蚴半胱氨酸蛋白酶基因表达实时定量PCR
- 贵州省安顺地区蛇源裂头蚴分离株的分子鉴定及种系发育关系分析被引量：3
- 2016年
- 目的对贵州省安顺地区蛇源裂头蚴分离株进行分子鉴定及种系发育关系的分析。方法采集贵州安顺地区4种常见野生蛇（王锦蛇、乌梢蛇、黑眉锦蛇、灰鼠蛇）来源的裂头蚴,分别提取各裂头蚴基因组DNA,PCR扩增ITS1和cox1基因,所得PCR扩增产物经纯化并T-A克隆后测序。运用ClustalX1.81生物分析软件,将所得序列与GenBank所录迭宫属绦虫和其它属绦虫基因序列进行多重序列比对分析,并应用软件MEGA 6.0构建系统发育树（邻位连接法）。结果成功扩增出8株裂头蚴的ITS1和cox1基因序列,ITS1大小为822～863bp,cox1大小为404～415bp,与预期的基因片段大小一致。基于ITS1和cox1基因序列构建的种系发育树与所有的猬迭宫绦虫均构成同一亚群,总分支的自展值高于50%,二者在不同的分离株之间呈现基因多态性。对8株裂头蚴ITS1和cox1序列的同源性进行比较,ITS1的同源性为70.27%～82.84%,而cox1的同源性为95.63%～99.50%,显示cox1的同源性高于ITS1。已向GenBank提交ITS1和cox1新序列各一条,登录号分别为KF990161和KJ418421。结论贵州安顺地区不同蛇源裂头蚴分离株之间存在基因多态性。从总分支的自展值来看,cox1比ITS1更适合用于种内遗传多态性研究,ITS1适合做定种的分子标记。
- 李金福刘艳丹陈艳裘学丽
- 关键词：裂头蚴
- 猬裂头蚴27kD半胱氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及生物信息学分析被引量：1
- 2017年
- 目的克隆、表达猬裂头蚴27kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)基因,并分析其生物学特性。方法提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增27kDa半胱氨酸蛋白酶(27kDa CP)基因,克隆入pMD-19T载体,测序正确后将27kDa-CP基因亚克隆入表达载体pET-28a(+),构建pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒,转入大肠埃希菌Transetta(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白27kDa CP。用镍离子柱亲和层析法纯化目的蛋白。表达产物用SDS-PAGE及Western Blotting进行分析,并运用NCBI和ExPASy等有关的生物信息学分析工具,对27CP基因及其编码蛋白进行预测和分析。结果 CP基因序列的开放阅读框长为1 011bp,去除信号肽序列长954bp,登录到GenBank,获得登录号ANA52569。该基因编码一个含317个氨基酸的蛋白多肽,属于Peptidase_C39_like超家族,理论分子量约35 669.9Da,等电点5.92。pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒经IPTG诱导后,蛋白在大肠埃希菌中成功表达,经纯化后的蛋白利用Western blotting检测,证明与预期大小相符,且与猬裂头蚴感染阳性血清有较好的结合反应。结论成功克隆、表达了猬裂头蚴27kDa CP基因,获知CP基因及其编码的氨基酸序列和生物信息学。
- 焦梦涵刘艳丹陈艳李金福
- 关键词：裂头蚴原核表达生物信息学
- 猬迭宫绦虫27kDa半胱氨酸蛋白酶编码cDNA的克隆、表达及时空表达模式研究
- 目的：分析猬迭宫绦虫27kDa半胱氨酸蛋白酶（Cysteine protease，CP）分子生物学特性，了解其在猬迭宫绦虫成虫和裂头蚴不同部位及裂头蚴不同感染时期的表达模式。 方法： 1.猬迭宫绦虫27kDa CP的...
- 刘艳丹
- 关键词：裂头蚴半胱氨酸蛋白酶克隆表达
