- Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶基因的克隆、表达及对酪氨酸的降解被引量：2
- 2016年
- 目的:从Aeromonas sp.XJ-6中克隆双加氧酶基因,初步探索该酶的功能,为芳香烃化合物的生物降解提供基因资源。方法:PCR扩增双加氧酶基因dio6,并实现该基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中的诱导表达。产物经Ni-NTA柱纯化后,通过薄层层析(TLC)和HPLC检测双加氧酶dio6对Tyr的降解效果,再结合LC-MS检测降解产物,并分析其可能的降解途径。结果:Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶基因dio6大小为1 194bp;通过金属鳌合亲和层析(MCAC)纯化后dio6表达产物的大小为44.9k Da。双加氧酶dio6对Tyr具有较强的降解作用。TLC和HPLC检测表明,在60μl酶量和30℃反应温度等条件下,Tyr降解较快;Mg^(2+)、Ca^(2+)略微抑制酶促反应,Mn^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)、Ca^(2+)促进底物降解,其中Mn^(2+)对双加氧酶影响最大。LC-MS分析表明,在双加氧酶dio6作用下,Tyr被降解为延胡索酸。结论:Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶dio6是一种苯环开环酶,为芳香烃化合物的生物降解提供了良好的基因资源。
- 杨杨杨江科熊炜梁建芳段魏魏晁群芳
- 关键词：双加氧酶苯环LC-MS
- 四种类型启动子控制下空肠弯曲杆菌血红蛋白对大肠杆菌生长速度的影响被引量：1
- 2016年
- 细菌血红蛋白可增加细胞在低氧条件下的氧气利用率,提高细胞的增长速率。为提高E.coli在现有发酵水平下的生物量,获得新型的基因工程底盘细胞,基于空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)血红蛋白基因,比较分析了组成型和诱导型启动子对血红蛋白在E.coli基因工程菌中的表达状况及对E.coli生长的影响。首先合成了空肠弯曲杆菌血红蛋白基因chb,并让chb基因在诱导型启动子(P_(T7)和P_(vgh))和组成型启动子(P2和P_(spoⅠ-Ⅱ))控制下表达;随后,测定了由四种类型启动子控制的血红蛋白工程菌在摇瓶和蓝盖瓶中的生长状况。结果表明四种重组菌可以表达出有活性的血红蛋白,并可显著提高大肠杆菌的生长;在发酵罐中的试验也表明四种工程菌同样对细胞生长具有出促进作用;进一步比较分析了菌体密度、细胞鲜重和CO差式光谱值间的相互关系,讨论了四种类型启动子控制的基因工程菌在诱导表达和生长调控等方面的特点,并为在微氧和好氧等不同发酵条件下选用基因工程底盘细胞提供了参考。
- 许力熊炜杨江科
- 关键词：空肠弯曲杆菌血红蛋白启动子
- 壳青霉内切纤维素酶结合位点的研究
- 纤维素酶是一类能够将纤维素降解为葡萄糖的多组分酶系的总称,它们协同作用分解纤维素产生寡糖和纤维二糖,最终水解为葡萄糖。在结构上,纤维素酶由催化结构域（CD）、结合结构域（CBD）组成,两个结构域由连接肽（Linker）相...
- 熊炜
- 关键词：纤维素酶催化结构域结合位点
- 文献传递
- 细菌血红蛋白及在生物工程领域的应用研究进展被引量：1
- 2016年
- 在需氧发酵的过程中,溶解氧是细胞生长的主要限制性因素。在生物工程领域,为维持溶液中合适浓度的溶解氧,则需要有复杂的生物反应器和严谨的发酵参数控制。在发酵条件下,提高细胞的氧的利用效率是克服生物反应器中的氧气不足的一种新型、高效的解决方案。细菌血红蛋白是氧结合蛋白,它能从环境中主动转运氧至代谢过程,并允许细菌即使在微需氧条件下生长。因此,通过细菌血红蛋白的异源表达可获得氧利用率高的"底盘"细胞,提高生产效率。阐述了细菌血红蛋白的分类和分布,重点综述了三类细菌血红蛋白的结构与功能,以及其在生物工程领域的应用状况及进展,拟为后续研究和广泛应用提供参考与借鉴。
- 熊炜许力杨江科
