李慧艳
- 作品数：44 被引量：53H指数：4
- 供职机构：国家生物医学分析中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学机械工程更多>>
- CUEDC1的克隆表达及其对PRB和ERα转录活性的影响被引量：3
- 2009年
- 为了研究CUEDomain Containing1(CUEDC1)蛋白质功能,构建了pcDNA3.0-Flag-CUEDC1表达载体,并且成功表达Flag-CUEDC1蛋白质。通过双荧光报告系统,对比CUEDC1与CUEDC2对PRB和ERα转录活性的影响。其结果显示,CUEDC2能够抑制PRB和ERα转录活性,而CUEDC1对PRB和ERα转录活性的影响不显著。
- 穆蕊赵洁陈媛张佩景李慧艳周涛张学敏李爱玲
- 关键词：CUEDC2转录活性
- EWS蛋白质抑制核因子κB的转录活性
- 2010年
- 目的:研究EWS蛋白质是否参与核因子κB(NF-κB)信号通路,以及EWS蛋白质对NF-κB转录活性的影响。方法:在真核细胞中表达Flag-EWS,利用Western印迹检测其表达;通过双萤光素酶光报告系统,研究EWS蛋白质对NF-κB转录活性的影响及其发挥作用的分子水平。结果:Western印迹检测到相对分子质量为95×103的Flag-EWS能够在真核细胞中正确表达,过表达EWS蛋白质能够抑制TNFα、IL-1β及poly(I:C)激活的NF-κB转录活性;EWS蛋白质能够抑制由过表达HA-TRAF2或HA-p65激活的NF-κB转录活性,其抑制NF-κB转录活性发生在p65转录因子水平。结论:过表达EWS能够抑制多种刺激激活的NF-κB转录活性,这种抑制作用发生在p65转录因子水平。
- 王晨辉魏传宇李文龙穆蕊方迪峰陈亮李慧艳巩伟丽周涛靳宝锋李爱玲
- 关键词：核因子ΚB转录活性
- CUEDC2突变体的构建及在原核和昆虫表达系统中的表达被引量：1
- 2011年
- 为构建CUEDC2的突变体并在原核和昆虫表达系统中表达验证,根据人cuedc2序列设计引物,以其突变体质粒为模板PCR扩增目的片段,酶切后连接至pET28a原核表达载体以及pFastBac1-Flag-N和pFastBac-HTA昆虫表达系统的表达载体。转化至DH5α后提取质粒,经菌液PCR、测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)及DH10Bac感受态细胞中。原核表达载体在E.coli中表达后用Ni-NTA亲和纯化,SDS-PAGE检测。昆虫表达载体提取杆粒,转染至昆虫细胞Sf9中表达。最后用western进行鉴定。结果成功构建了CUEDC2的突变体,并在原核和昆虫表达系统中表达。说明在原核和昆虫表达系统中,成功表达的CUEDC2突变体蛋白为CUEDC2的结构和功能研究奠定了基础。
- 王玉博高彦飞李腾常艳穆蕊徐金敬王芊艺巩伟丽于鸣李慧艳
- 关键词：CUEDC2昆虫突变体
- HeLa/GFP—H2B细胞系的构建及对其有丝分裂进程的动态观察被引量：3
- 2011年
- 准确的染色体分离依赖于有丝分裂过程的精确调控,包括有丝分裂的时间,及纺锤体检查点的正确调控等。通过动态观察有丝分裂染色体的运动可对上述研究进行精确定量。结果显示,利用逆转录病毒系统成功构建了稳定融合表达绿色荧光蛋白GFP—H2B的HeLa细胞系,结合细胞同步化方法,建立了一套利用活细胞荧光共聚焦显微镜观察HeLa细胞有丝分裂的实验体系。
- 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：有丝分裂细胞同步化
- 长链非编码RNA21905在有丝分裂期中的功能研究
- 2017年
- 长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类长度超过200 nt,并不编码蛋白质的RNA分子。近年来关于lncRNA的研究逐渐成为热点,但绝大部分lncRNA的功能仍不清楚。本实验室前期Arraystar lncRNA芯片分析发现lncRNA21905在有丝分裂期的表达量显著高于细胞分裂间期,提示该lncRNA在有丝分裂期中可能有一定功能。研究通过siRNA干扰技术,在肿瘤细胞中敲低lncRNA21905,发现敲低该lncRNA可导致肿瘤细胞有丝分裂期的明显阻滞。此外,TANRIC数据库分析表明,lncRNA21905高表达的肾透明细胞癌患者预后较差。综上所述,研究表明lncRNA21905在肿瘤细胞有丝分裂期中发挥了重要调控作用,这可能为进一步揭示其参与肾透明细胞癌预后提供理论基础。
- 胡怀斌王光常艳秦璇和李慧艳
- 关键词：有丝分裂期肾透明细胞癌
- 体外APC/C活性体系的建立及其影响因素的研究
- 2011年
- 为获得具有细胞周期后期促进复合物(APC/C)活性的细胞裂解液并建立APC/C体外活性检测体系,以其底物Cyc-lin B及Securin的降解为检测指标,分别从细胞阻滞于有丝分裂期的时间,UBCH10(APC/C的E2酶)的浓度以及裂解液浓度等几个方面研究了各种处理因素对APC/C活性的影响,并且用体外翻译底物验证了其活性及相关结论。此项工作为进一步探索APC/C相关分子事件奠定了基础。
- 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：CYCLINSECURINUBCH10活性
- 基于单细胞荧光成像技术的昼夜节律监测分析被引量：1
- 2023年
- 昼夜节律作为机体的无形时钟精密调控多种生理功能,包括睡眠、觉醒、大脑认知、免疫力等。下丘脑视交叉神经上核(suprachiasmatic nucleus, SCN)作为昼夜节律系统的主起搏器,能够自主产生节律性输出信号,协调维持全身多个组织、器官的时钟变化。同时,SCN通过神经元间的耦合作用,实现不同神经细胞节律性变化的步调一致性,产生强劲的振荡性规律,以维持机体内部节律稳定、抵抗外界环境因素干扰。为直观的研究SCN区在机体昼夜节律中的功能,实现单细胞尺度观测SCN神经元节律性变化,本研究搭建了单细胞荧光成像系统,通过深度制冷CCD相机,利用荧光素酶报告基因系统,对体外分离培养的SCN脑片进行长周期实时成像,原位观察SCN区不同细胞节律基因的振荡性表达规律。利用Eviews、IgorPro等软件,对荧光强度在单细胞尺度及时间尺度上进行量化分析,最终实现了在单细胞水平监测观察节律基因的振荡性变化。利用河豚毒素(TTX)能够可逆性的破坏SCN细胞间的耦合作用,验证了该系统的可行性。综上,本研究成功搭建了基于荧光素酶报告基因系统的单细胞实时荧光成像平台及分析技术,实现了对SCN神经元基因表达节律性变化的实时监测。
- 李森许钰铃王佳荣李佩瑶何春雨于希平李慧艳张宇程胡怀斌宋增庆王凯韩秋影涂海情
- 关键词：昼夜节律SCN荧光素酶CCD实时成像
- Mad2蛋白在有HeLa细胞有丝分裂期的动态定位
- 2011年
- 在细胞有丝分裂中纺锤体检查点对保证遗传信息的稳定性有着重要的调控意义。其中Mad2蛋白作为纺锤体检查点蛋白在前中期被招募到未与微管正确结合的着丝粒上,从而保证纺锤体检查点的激活并抑制后期的开始。通过活细胞荧光共聚焦显微镜对Mad2的定位动态追踪,定量了其在有丝分裂过程中位于着丝粒上的光强变化,从而为研究纺锤体检查点的功能提供了依据。而Mad2本身的蛋白表达过强过弱均可导致肿瘤的发生,因此通过对其有丝分裂中光强的定量也为研究肿瘤的发生机制提供了线索。
- 李腾高彦飞常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：MAD2有丝分裂
- CUEDC2通过抑制IKK复合体磷酸化下调NF-κB通路
- CUEDC2目前是一个功能未知的蛋白质，通过生物信息学分析发现，CUEDC2包含一个CUE结构域。CUE是一个非常小的中度保守的结构域，大约包含40个氨基酸，预测它能和泛素结合，既能识别单泛素化又能识别多泛素化，目前发现...
- 李慧艳
- 关键词：IKKNF-ΚB
- 文献传递
- 肿瘤转移相关基因syntenin的融合表达及纯化
- 2004年
- 肿瘤相关基因syntenin在乳腺癌的转移和浸润过程中发挥重要作用。syntenin基因编码蛋白的C端有2个串联的PDZ(PDZ1和PDZ2)结构域,它们与该蛋白的功能密切相关。PDZ结构域存在于多种蛋白质中。用PCR方法扩增了syntenin全长、N端(ΔPDZ)、串联重复的PDZ(2PDZ)、PDZ1和PDZ2结构域编码序列,并将其以正确相位与pGEX-2T载体中的GST序列编码融合,构建成重组质粒pGST-syntenin、pGST-ΔPDZ、pGST-2PDZ、pGST-PDZ1和pGST-PDZ2。将这些重组质粒分别转化E.coliDH5α后,分别表达了相应的GST融合蛋白。Westernblot检测结果表明,2种融合蛋白均能与GST抗体反应。表达的GST融合蛋白经谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白,为PDZ结构域及其相关蛋白功能研究提供了有用的材料。
- 李慧艳潘欣靳宝峰满江红叶棋浓军事医学科学院生物工程研究所张学敏
- 关键词：肿瘤基因SYNTENIN纯化乳腺癌
