张中海
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目哈尔滨市科技攻关计划项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学语言文字更多>>
- 一氧化氮供体和他汀对B组柯萨奇病毒感染的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究硝酸酯类和他汀类等一氧化氮(NO)供体的抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用及其特点和机制。方法用TCID_(50)和空斑形成实验测定CVB3的毒力;MTT法确定NO供体药物的无毒性浓度;利用细胞病变效应(CPE)抑制实验和空斑形成抑制实验分析NO供体药物对CVB3在HeLa细胞和ECV-304细胞中增殖的抑制作用;并分析硝酸甘油(GTN)不同给药次数、NO浓度变化以及NO浓度与GTN对CVB3抑制效应间的相关性。结果硝酸酯类药物GTN、硝酸异山梨酯可明显抑制CVB3所致的CPE及空斑形成(P<0.05),他汀类药辛伐他汀、洛伐他汀均未显示抑制CVB3所致的CPE(P>0.05);CVB3接种前预先与GTN作用、CVB3接种同时加入GTN两种条件下CPE抑制率差异无统计学意义(P>0.05);CVB3攻击后多次给予GTN的组间CPE抑制率差异无统计学意义(P>0.05),但在CVB3攻击前不同时间点给予GTN的组间CPE抑制率差异有统计学意义(P<0.05);NO浓度与不同时间点给予GTN的CPE抑制结果呈正相关(r=0.97,P<0.01)。结论NO供体类药物硝酸酯类具有明确的抗CVB3感染作用,其抗CVB3增殖的作用与NO浓度呈正相关;他汀类药物在本实验条件下未观察到抗CVB3增殖作用,原因可能是细胞类型与他汀不匹配。
- 史巧云钟照华李晓波孙艳影张中海张凤民谷鸿喜
- 关键词：一氧化氮供体柯萨奇病毒B组3型硝酸酯类他汀
- 玉丹荣心丸抗急性病毒性心肌炎的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的观察中成药玉丹荣心丸对B组柯萨奇病毒(CVB)感染Balb/c小鼠所致急性病毒性心肌炎的治疗效果的研究。方法Balb/c鼠腹腔接种1000 TCID50/0.1ml CVB,经过两周的持续注射成功获得急性病毒性心肌炎的动物模型。将动物随机分为病毒对照组、药物组,药物组使用中成药玉丹荣心丸进行灌胃给药,而病毒对照组不使用任何药物,28天后观察小鼠心肌组织的病理改变。结果药物组小鼠心肌组织的病理改变轻微,并有好转迹象,而病毒对照组病理改变严重,有死亡。结论玉丹荣心丸对B组柯萨奇病毒感染所致的急性病毒性心肌炎有很强的治疗效果。
- 赵晶张中海刘剑孙艳钟照华
- 关键词：玉丹荣心丸病毒性心肌炎B组柯萨奇病毒小鼠
- 博尔纳病病毒感染对少突胶质瘤细胞中IL-1β表达量的影响
- 2009年
- 目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对少突胶质瘤细胞(oligodendrocyte,OL)中白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)蛋白表达的影响。方法首先将OL和BDV感染的OL煮沸裂解,分别提取蛋白混合液,测定蛋白的浓度后,将二者的蛋白混合液浓度均调至10 g/L,分别取蛋白混合液及其经10 000 r/min离心5 min后的上清,沉淀后分别进行斑点免疫印迹试验(dot-blot hybridization),检测OL和BDV感染的OL中IL-1β的存在;同时,对提取的OL和BDV感染的OL中的蛋白混合液进行2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验,检测细胞中的IL-1β的表达量的变化。结果斑点免疫印迹试验表明,OL和BDV感染的OL中提取的蛋白混合液及收集的沉淀均出现杂交阳性信号,而蛋白混合液离心后的上清未出现杂交阳性信号。等量的OL和BDV感染的OL的蛋白混合液经2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验,OL的蛋白混合液在≤32倍的稀释度范围内有杂交阳性信号,BDV感染的OL的蛋白混合液在≤8倍的稀释度范围内有杂交阳性信号。结论①IL-1β在OL和BDV感染的OL中均存在,且存在于本实验获得的蛋白混合液和沉淀中。②BDV感染使OL中的IL-1β的表达量降低,提示IL-1β的表达量下降,有可能使其参与的脑内的免疫生理及病理反应发生变化,这可能是BDV感染致病的机制之一。
- 张中海车洋
- 关键词：博尔纳病病毒白细胞介素-1Β
- Balb/c乳鼠心肌细胞的分离和体外培养方法的优化被引量：2
- 2007年
- 目的探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法。方法取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响。结果原代培养的Balb/c乳鼠心肌细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰。分离细胞时消化次数最好控制在不多于6次,每次消化时间不超过20min。2h差速贴壁可以提高心肌细胞纯度,经肌动蛋白鉴定,心肌细胞达94.6%。结论本研究优化了分离和原代培养Blab/c乳鼠心肌细胞的方法。
- 张中海包琳史巧云李晓波钟照华
- 关键词：心肌细胞原代细胞培养
- iNOS基因和iNOS—VP1融合基因真核表达载体的构建及初步表达
- 2007年
- 目的 构建pcDNA3．1介导的诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）的基因表达载体和pcDNA3．1介导的iNOS与柯萨奇病毒B组3型（CVB3）结构蛋白VP1融和基因的表达载体。方法 应用PCR扩增和DNA重组技术构建pcDNA3．1-iNOS和pcDNA3．1-iNOS—VP1表达载体；应用真核细胞转染技术及间接免疫荧光技术进行所构建的真核表达载体的初步表达和鉴定。结果 经PCR扩增技术用特异引物从质粒pKSiNOS分离编码iNOS开放阅读框架的cDNA，TA克隆于pMD19-T载体，根据设计引物时加入的酶切位点将插入片断亚克隆于表达载体pcDNA3．1；经PCR扩增技术用特异引物从质粒pCR2．1-VP1分离编码CVB3VP1结构蛋白的cDNA，TA克隆于pMD19-T载体，根据设计引物时加入的酶切位点将VP1亚克隆于iNOS的表达载体pcDNA3．1-iNOS，从而构建含有iNOS和VP1融合基因的真核表达载体。限制性内切酶分析、PCR鉴定和测序证实重组体peDNA3．1-iNOS和peDNA3．1-iN—OS—VP1插入片断的大小和方向正确且开放阅读框架的读码框不变；重组质粒peDNA3．1-iNOS和peDNA3．1-iNOS．VP1在HeLa细胞中均有表达，但表达效率较低。结论 获得含iNOS基因和iNOS—VP1融合基因的真核表达载体，并将重组质粒进行了初步表达，为体外iNOS抗CVB3作用的研究奠定了物质基础。
- 史巧云钟照华张中海赵文然李小波张凤民
- 关键词：诱导型一氧化氮合成酶真核表达载体
- B组柯萨奇病毒对心肌细胞感染模式的研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察B组柯萨奇病毒(Coxsackie virus B,CVB)在原代心肌细胞中的感染特点,从而研究CVB对心肌细胞的致病机制。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞,并获得纯化的心肌细胞。使用B组柯萨奇病毒嗜心肌毒株3型(CVB3m)攻击原代心肌细胞,观察病毒感染心肌细胞后心肌细胞的细胞病变、超微结构和心肌酶的变化。结果成功原代培养了Balb/c乳鼠心肌细胞。心肌细胞在病毒感染后,细胞病变(CPE)不明显,与在HeLa等细胞中的典型CPE不同。心肌细胞在CVB3m感染后保持细胞形态和博动超过2周时间。电镜显示心肌细胞结构正常,细胞器数量增加,在心肌细胞胞质中可见晶格样病毒颗粒排列。培养细胞的上清液中心肌酶升高。结论CVB在原代心肌细胞中表现为持续感染,CVB在心肌细胞中的致病机制不同于HeLa细胞。
- 张中海张琦闫长栋钟照华
- 关键词：心肌细胞B组柯萨奇病毒原代细胞培养
- 表达红色荧光蛋白重组柯萨奇病毒B组3型基因组稳定性分析被引量：1
- 2012年
- 本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性。用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达。收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力。将重组病毒CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传代,提取第2～6代重组病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出报告基因mCherry及CVB3部分序列,进行测序分析。结果表明,pCVB3-mCherry转染的HeLa细胞出现细胞病变并表达红色荧光蛋白mCherry;从第2代开始,CVB3-mCherry出现报告基因mCherry及部分CVBVP4基因序列丢失,基因序列丢失导致病毒开放读码框架移位。本研究表明,mCherry基因序列的插入导致CVB3基因组不稳定。随着病毒的传代逐渐丢失插入的报告基因mCherry及CVB3基因组的部分序列,病毒读码框架移位,产生致死性突变株。因此,应用CVB3-mCherry时,病毒的传代次数不超过2代,否则应重新从重组质粒中收获病毒,并对每代重组病毒进行纯化和毒力测定。
- 赵文然钟学宽张淑娟沃晓嫚张中海王博钟照华
- 关键词：柯萨奇病毒B组3型红色荧光蛋白MCHERRY基因重组
- 生理学双语教学的实践与初探
- 总结和回顾多年来的双语教学工作我们有如下的体会:1.加强师资培训。施双语教学师资是关键。教研室有两名在英、美工作过多年并有丰富的教学经验的教授,他们参与双语教学的集体备课,讨论制定出成熟的双语教学教案和制作出重点难点突出...
- 马鸿基孙红乔伟丽阎长栋吴金霞王光明高利平张中海
- 关键词：双语教学生理学
- 文献传递
- 低硒小鼠模型的建立及低硒对心肌的影响被引量：2
- 2010年
- 目的建立低硒实验动物模型,观察低硒对心肌的影响。方法利用黑龙江地产酵母配制低硒小鼠饲料,使用配制的小鼠饲料喂养BALB/c幼鼠,经过4个月的喂养,测定血清、肝脏、心肌细胞的硒含量,观察心肌超微结构的变化,测定血清心肌酶的变化。结果利用黑龙江地产酵母配制的低硒饲料,硒含量为0.016 mg/kg,符合低硒标准。BALB/c鼠用该饲料喂养4个月,心肌、肝脏、血清硒含量分别为0.187 mg/kg、0.219 mg/kg、0.241mg/kg,符合低硒诊断标准。观察低硒鼠心肌超微结构,可见心肌细胞线粒体肿胀,细胞核出现了异型性,血清心肌酶较常硒鼠升高。结论利用黑龙江地产酵母成功配制了低硒饲料。经过低硒饲料饲养可建立低硒鼠模型。低硒可以引起BALB/c鼠心肌细胞损伤。
- 张琦张中海钟照华朱孝荣
- 关键词：硒缺乏BALB/C鼠心肌细胞
- B组柯萨奇病毒在原代培养心肌细胞中的持续感染
- B 组柯萨奇病毒(coxsackievirus group B,CVB)属小 RNA 病毒科、肠道病毒属,是引起病毒性心肌炎的主要病原体。尽管多数急性心肌炎患者可痊愈,仍有少数 CVB 感染者转为慢性,并可发展为扩张型心...
- 赵文然张中海钟照华
- 关键词：心肌细胞病毒持续感染
- 文献传递
