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赵文然: 作品数：44 被引量：97H指数：5; 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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miR-122启动子序列的克隆及特异性分析被引量：1: 2011年; 目的miRNA-122启动子序列的预测、克隆及特异性分析。方法分别从肝癌细胞系Huh-7及HepG2中扩增出预测的miR-122启动子，并将其克隆至含荧光素酶（fireflyluciferase，Fluc）报告基因pGL4．17质粒上，用重组质粒转染Huh-7、HepG2及HeEa细胞，分析启动子的特性。结果成功预测并克隆出miR-122的启动子序列。重组质粒转染细胞后，启动子能够启动Fluc的表达。用含启动子P1的重组载体pGL4．17-P1转染HeLa细胞后，用两种荧光素酶检测体系测得重组载体中荧光素酶的表达水平显著高于对照组（t：0．00021，P〈0．01及t=0．00038，P〈0．01）。结论Huh-7、HepG2细胞中miR-122表达差异与启动子序列缺失无关。而受miR-122启动子调节的报告基因在非肝细胞系（HeLa）中也表达，表明miR-122启动子不具有肝细胞特异性。; 张超武帅钦林乐勋陈晓凤杨爱英沃晓嫂钟照华赵文然; 关键词：MIR-122 启动子报告基因

用痘苗病毒增强人类白血病细胞抗原性的初步研究: 赵文然

热休克蛋白70与肠道病毒感染被引量：1: 2016年; 热休克蛋白70（HSP70）是HSP70家族中的重要成员。HSP70的主要功能是作为分子伴侣参与蛋白质的折叠与修饰。在病毒感染时，HSP70参与机体的抗感染免疫，从而保护细胞。因而研究HSP70与肠道病毒的相互作用具有意义。; 王华鹏赵文然; 关键词：热休克蛋白70 肠道病毒 TOLL样受体细胞凋亡

Sulforaphane抑制热灭活大肠杆菌诱导的HeLa细胞凋亡被引量：1: 2019年; 目的研究Sulforaphane(SFN)对细胞凋亡的抑制作用及其在脓毒症中对细胞的保护作用。方法将HeLa细胞分为4组:对照组、热灭活大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)处理组、SFN处理组(SFN组)和热灭活E.coli+SFN组。酶联免疫反应检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α;流式细胞术(annexin V/propidium iodide双染)检测细胞凋亡;免疫荧光检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及线粒体膜电位的变化;Western blot检测活化的caspase 3、bax和bcl-2水平。结果热灭活E.coli处理后,细胞产生的炎症因子IL-1β[(121.13±8.44)pg/mL比(36.67±5.82)pg/mL,P<0.05]和TNF-α[(123.83±7.32)pg/mL比(20.63±1.91)pg/mL,P<0.05]明显升高、凋亡细胞数明显增加[(32.49±3.96)%比(12.52±1.37)%,P<0.05]、活化的caspase 3[(2.28±0.19)比(1.01±0.19),P<0.05)]和BAX[(4.81±0.80)比(1.04±0.25),P<0.05)]水平明显升高,而bcl-2[(0.27±0.08)比(0.96±0.18),P<0.05)]水平明显降低。用SFN处理后(包括SFN组、热灭活E.coli+SFN组),IL-1β[(45.41±13.16)pg/mL比(121.13±8.44)pg/mL,P<0.05],TNF-α[(30.3±6.0)pg/mL比(123.8±7.3)pg/mL,P<0.05]水平明显降低、凋亡细胞明显减少[(11.34±2.05)%比(32.49±3.96)%,P<0.05]、活化的caspase3[(1.01±0.07)比(2.282±0.19),P<0.05)]、BAX[(2.15±0.14)比(4.81±0.80),P<0.05)]明显减少,而bcl-2[(1.34±0.18)比(0.27±0.08),P<0.05)]水平明显增加。与此相对应,与灭活E.coli处理的细胞相比较,加入SFN(包括SFN组和热灭活E.coli+SFN组),ROS水平明显下降[(1.27±0.17)比(6.30±1.50),P<0.05)],而线粒体膜电位明显上升[(1.18±0.10)比(0.14±0.01),P<0.05)]。结论SFN可有效抑制热灭活E.coli诱导的HeLa细胞调亡、稳定线粒体膜电位、降低ROS、抑制炎性因子的产生。因此,SFN可能作为脓毒血症时保护细胞的药物。; 张箭张箭瞿丛王瑶王瑶赵文然; 关键词：SULFORAPHANE 细胞凋亡活性氧炎症因子

含有柯萨奇B3病毒2C蛋白中1-79位氨基酸基序的蛋白质及其应用: 本发明公开了一种含有柯萨奇B3病毒2C蛋白中1-79位氨基酸基序(SEQ ID NO.1所示)的蛋白质及其应用，优选的，所述的蛋白质为柯萨奇B3病毒2C蛋白及其截短型蛋白，更优选为SEQ ID NO.1所示的蛋白质。本发...; 钟照华王燕赵文然佟雷林乐勋王瑞雪秦颖

人类磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的真核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2006年; 目的在真核细胞中表达人磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)并制备抗PHGPx多克隆抗体。方法用特异引物从人睾丸组织cDNA文库中扩增出人线粒体型PHGPxcDNA,与真核表达载体pcDNA3.1/His重组,在COS-1细胞内表达PHGPx。用大肠杆菌表达的突变的PHGPx免疫动物,制备抗PHGPx抗体。结果重组体pcDNA-PHGPx转染的COS-1细胞表达了人PHGPx融合蛋白,PHGPx活性为111.5μmol·mg-1·min-1,高于对照组5倍。免疫扩散测得抗PHGPx多克隆抗血清滴度为1∶16;用于蛋白印迹时稀释倍数为1∶500,可见特异免疫沉淀条带。结论人PHGPx在COS-1细胞内获得了表达,抗PHGPx多克隆抗体有特异性,可以用于重组表达的PHGPx的鉴定。; 赵文然钟翔宇孙辉周令望曲章义钟学宽; 关键词：基因表达抗体硒

影响以问题为基础学习教学方法成效的关键因素被引量：19: 2008年; 以问题为基础的学习（problem—based leaning，PBL）是以学生为中心、基于问题的、学科交叉的教学方法。成功的PBL是学生通过自主讨论过程获得多学科融合的知识，同时培养分析和解决问题的能力以及交流能力等多种能力。在实践中发现，一个以系统为基础的垂直整合的课程计划，辅以适当的硬件设备，10人以下的分组规模，编写严密的案例，培训良好的指导教师和学生，对于PBL教学效果具有较大的影响。; 钟照华张凤民赵文然程志张雅芳曹博曹德品

痘苗病毒增强人类白血病细胞免疫原性的实验研究被引量：1: 1990年; 作者应用痘苗病毒处理人白血病细胞制备瘤苗,免疫正常615系小鼠。结果发现,实验组小鼠的NK细胞活性、白细胞介素-2(IL-2)诱生水平显著提高,T辅助细胞数及T_(11)/Ts比值显著提高(与对照组相比,P<0.01或P<0.05),未经痘苗病毒处理的人白血病细胞则无此作用。; 赵文然谷鸿喜李绍贤孟德润王孟学夏立娟; 关键词：痘苗病毒白血病细胞免疫疗法

表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定: 2015年; 目的构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶（humanizedform of Renilla Luc,hRLuc）、荧火虫荧光素酶（firefly luciferase,Luc）的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4（107 pfu/ml）.结论成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.; 王慧武帅钦陈阳钟照华赵文然佟雷; 关键词：柯萨奇病毒B组3型基因重组

表达miR-10α的重组腺病毒的构建与鉴定被引量：1: 2011年; 目的构建表达miR．10a的重组腺病毒（adenovirus，Ad）载体。方法用红色荧光蛋白mCherry基因替换穿梭质粒pDC316-EGFP—U6的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因。利用表达siRNA的策略，合成编码miR-10a的长链DNA序列，双链退火后克隆至pDC316，mCherry—U6获得pDC316-mCherry—U6-miR-10α。pDC316-mCherry-U6-miR-10α与骨架质粒pBHGlox△E1，3Cre共转染HEK293细胞，包装成复制缺陷型重组腺病毒Ad-miR-10α空斑形成实验纯化、扩增、滴定重组腺病毒。Ad-miR-10α感染HeLa细胞后在荧光显微镜下观察mCherry表达，用RT—qPCR检测miR-10α表达。结果构建的pDC316-mCherry—U6-miR-10α序列正确，荧光显微镜下可见mCherry的表达，重组腺病毒Ad—miR-10α滴度为1．8×10^7pfu／mL，感染HeLa细胞后miR-10α表达较mock高40倍。结论成功构建了表达miR-10α的首组腺病毒．siRNA表达策略可用于miRNA的人工表达。; 李云霞陈晓凤林乐勋佟雷郭志伟秦颖赵文然王燕钟照华; 关键词：MIRNA 腺病毒载体小干扰RNA

赵文然

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