目的:观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)VP1核酸疫苗pcDNA3/VP1与重组腺病毒Ad/VP1联合应用的免疫效果。方法:大量制备pcDNA3/VP1和Ad/VP1,肌肉注射免疫小鼠。4～6周龄雄性BALB/c小鼠随机分为4组:质粒组,注射pcDNA3/VP1,共3次;腺病毒组,注射Ad/VP1,共2次;质粒/腺病毒组,第1、2次注射pcDNA3/VP1,第3次注射Ad/VP1;PBS对照组。各次注射间隔时间为3周。质粒每次接种100μg/只,腺病毒每次接种4×107pfu/只。用微量中和试验和ELISA法分别检测每次免疫后血清中和抗体和IgG抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性;用致死量病毒感染后检测血中病毒滴度,并观察小鼠的生存情况。结果:各实验组小鼠的中和抗体和IgG抗体水平均随免疫次数增加而提高,末次免疫后,质粒/腺病毒组血清中和抗体和特异性IgG抗体滴度(31.70±1.41,2425.15±1.86)明显高于质粒组(23.78±1.37,918.96±1.36)和腺病毒组(18.88±1.22,800.00±1.63)(P<0.05);各实验组淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性高于PBS对照组(P<0.05);以致死量病毒感染后,质粒/腺病毒组血清病毒滴度低于其他组(P<0.05),生存率高于其他组(P<0.05)。结论:核酸疫苗与重组腺病毒联合应用可以明显提高免疫效果。
[目的]观察柯萨奇病毒B3(coxsackievirus group B type3,CVB3)VP1蛋白和重组腺病毒Ad/vp1单独及联合应用的免疫效果。[方法]大量扩增重组腺病毒Ad/vp1,制备并纯化CVB3/VP1蛋白,肌肉注射免疫BALB/c小鼠。小鼠随机分为4组:腺病毒组:肌肉注射Ad/vp1,共2次;蛋白组:注射VP1蛋白,共3次;腺病毒/蛋白组:第1次注射Ad/vp1,第2、3次注射VP1蛋白;PBS对照组。各次注射间隔时间为3周。腺病毒每次接种4×107pfu/只,VP1蛋白每次接种100μg/只。用中和试验法和ELISA法分别检测每次免疫后血清中和抗体和IgG抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性;用致死量病毒感染后检测血中病毒滴度,并观察小鼠的生存情况。[结果]中和抗体滴度及血清特异性IgG抗体水平随免疫次数增加而提高,末次免疫后,蛋白组(71.26±1.31,33779.40±1.46)、腺病毒/蛋白组的(56.56±1.44,22286.09±1.36)中和抗体及IgG抗体滴度明显高于腺病毒组(16.82±1.37,800±1.63)(P﹤0.05);蛋白组、腺病毒/蛋白组、腺病毒组的CTL杀伤活性明显高于PBS组(P﹤0.05);用致死量CVB3感染后,蛋白组、腺病毒/蛋白组的血中病毒滴度低于其他组,而生存率高于其他组(P﹤0.05)。[结论]蛋白组、腺病毒/蛋白组免疫小鼠的效果明显优于腺病毒组和PBS组。
