卢明枝
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EV71通过2A蛋白酶切割Nup62而抑制核转运被引量：6
- 2013年
- 为了解EV71病毒对细胞核转运机制的影响,本研究构建了具有核定位信号的绿色荧光蛋白表达载体(pG-FP-NLS)。将此表达载体转染细胞后,使用EV71病毒感染转染细胞,结果发现EV71病毒可以有效阻止绿色荧光蛋白的核转移。将EV71病毒的2A蛋白酶真核表达载体与pGFP-NLS共转染RD细胞,可以发现2A蛋白酶可阻止具有核定位信号的绿色荧光蛋白的核转移而使绿色荧光蛋白表达于细胞浆。为了进一步研究病毒阻止核转移的机制,病毒感染细胞或通过转染2A蛋白酶真核表达载体进行Nup62的Western blotting检测,结果显示病毒以及2A蛋白酶均可引起Nup62表达下降。证明EV71可通过2A蛋白酶切割Nup62从而抑制核转运。
- 张亚洲甘星宋娟孙鹏宋芹芹李公启盛琳君王宝栋卢明枝李灵敏韩俊
- 关键词：肠道病毒71型核转运
- CVB32A蛋白酶抑制帽样结构依赖的蛋白翻译
- 2013年
- 目的探讨CVB3的蛋白酶2A对真核细胞帽样蛋白翻译和内部核糖体进入位点（IRES）翻译机制的影响。方法构建表达载体pcDNA3．1—2A，将此表达载体分别与pEGFP—N1、pGL3（F-luc）以及pIRES-GFP载体共转染细胞后，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，检测荧光素酶蛋白的表达。WesternBlot检测CVB3病毒和pcDNA3．1-2A对真核生物翻译起始因子4GI（eIF4GI）及多聚A尾结合蛋白（PABP）的影响。结果pcDNA3．1之A可以减少帽样依赖的GFP和荧光素酶蛋白的表达，但可以促进IRES依赖的GFP表达。CVB32A基因质粒转染和CVB3感染后，均可发现细胞内elF4G的切割现象；同时CVB3对PABP也有降解作用，而CVB32A基因转染对PABP无明显作用。结论CVB3的蛋白酶2A抑制真核细胞帽样途径蛋白翻译，促进IRES途径的翻译。
- 卢明枝宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君王宝栋迟苗苗姚海兰李朝品韩俊
- 关键词：柯萨奇病毒感染蛋白激酶类核糖体
- EMCV3C蛋白酶抑制真核细胞蛋白质合成的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨脑心肌炎病毒（EMCV）的3C蛋白酶对真核细胞转录及翻译机制的影响.方法 构建真核表达载体pcDNA3.1-3C,将表达载体分别与帽样依赖的绿色荧光蛋白（GFP）表达载体pEGFP-N1和萤火虫荧光素酶（Fluc）载体pGL3载体共转染细胞后,检测GFP和Fluc的表达.Western Blot检测EMCV病毒和pcDNA3.1-3C对真核生物翻译起始因子4GI（eIF4GI）及多聚A尾结合蛋白（PABP）的影响.RT-PCR检测pcDNA3.1-3C对GFP mRNA转录水平的影响.结果 EMCV-3C可以抑制帽样依赖的GFP和Fluc的表达.EMCV 3C和EMCV病毒感染均导致细胞内PABP发生切割,而对eIF4GI均无明显作用.EMCV-3C也可导致GFP基因mRNA转录水平下降.结论 EMCV的蛋白酶3C通过mRNA转录水平的抑制和PABP的切割而抑制真核细胞帽样结构依赖途径的蛋白翻译,从而抑制蛋白质的合成.
- 王宝栋宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君卢明枝迟苗苗任云青韩俊
- 关键词：脑心肌炎病毒蛋白质工程
- 柯萨奇病毒B3蛋白酶2A干扰核因子κB p65的二聚体形成和核转移
- 2014年
- 为探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)蛋白酶2A是否通过干扰核因子κB(NF-κB)的核定位而影响细胞因子表达,构建CVB3蛋白酶2A的表达载体pcDNA3.1-2A。将此表达载体与核转录因子NF-κB基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NF-κB promotor-Luc共转染细胞,经肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激,检测荧光素酶表达;通过免疫荧光和蛋白免疫印迹检测CVB3蛋白酶2A对NF-κB核定位和二聚体形成的影响。结果显示,CVB3蛋白酶2A可减少NF-κB二聚体形成,并干扰其核转移。本研究证实,CVB3蛋白酶2A可通过干扰NF-κB二聚体形成和核转移而影响细胞因子分泌。
- 盛琳君宋芹芹卢明枝宋娟孙鹏王宝栋迟苗苗韩俊
- 关键词：柯萨奇病毒B3核因子ΚB
- 脑心肌炎病毒（EMCV）3C真核表达载体的构建及其功能鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的EMCV的pEGFP-3C真核表达载体的构建及功能鉴定。方法RT—PCR扩增EMCV功能蛋白3c基因并克隆至pEGFP—C3载体中，经双酶切和测序鉴定。将重组质粒分别转染到BHK-21细胞和293T细胞48h后，Western—Blot检测3c蛋白酶的表达，以及对PABPl的切割，共聚焦显微镜观测3c荧光表达位置。结果EMCV的pEGFP-3C重组质粒经双酶切及测序鉴定构建正确。表达的GFP融合蛋白相对分子质量约为49×10^（3），可切割PABPl，并表达于细胞核内。结论成功构建了EMCV的3c蛋白酶的真核表达载体pEGFP-3C，为进一步研究该蛋白酶的功能及作用奠定了基础。
- 李梅宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君卢明枝迟苗苗王宝栋韩俊
- 关键词：脑心肌炎病毒基因质粒
- CVB3 2A蛋白酶对蛋白翻译的影响
- 目的构建CVB32A蛋白酶的真核表达载体和缺失突变体，观察2A及缺失突变体对细胞蛋白翻译的影响。探讨CVB3病毒的蛋白酶2A对真核细胞帽样蛋白翻译途径和内部核糖体进入位点(IRES)翻译途径的影响。 方法利用分子克隆技...
- 卢明枝
- 关键词：蛋白酶真核表达载体缺失突变体分子克隆
- 文献传递
