程胖
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用RNAi抑制牛胎儿成纤维细胞中prnp基因的表达
- 疯牛病是牛海绵状脑病(Bovine spongiform Eneephalopathy,BSE)的俗称,是由朊病毒引起的一种传染性的,慢性的,致死性的中枢神经系统退行性疾病。疯牛病是由Prnp基因编码的朊病毒蛋白PrPc...
- 程胖
- 关键词：海绵状脑病朊蛋白PRNPBSE牛胎儿成纤维细胞
- 文献传递
- 牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染被引量：3
- 2010年
- 利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。本研究采用正负筛选策略,构建了牛prnp基因的双等位基因敲除载体,经内切酶Sac Ⅱ线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞,分别用600μg/mL G418、200nmol/mL Ganciclovir(GCV)进行正负药物筛选,最终获得了176个药物抗性细胞克隆,进一步采用PCR、测序、间接免疫荧光试验及Western blotting试验对细胞克隆进行鉴定,结果表明,其中的9个细胞克隆为中靶细胞,证明牛prnp基因被成功敲除。本研究为牛prnp的敲除提供了可行性依据,并为体细胞核移植生产敲除朊蛋白基因的转基因动物提供供体细胞。
- 张海林程胖兰杰宋永利张涌
- 关键词：基因打靶朊蛋白牛胎儿成纤维细胞PRNP间接免疫荧光BLOTTING
