张海林
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 相关领域：生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 一种基于樟子松的防风固沙障
- 本实用新型提供一种基于樟子松的防风固沙障，涉及防风固沙领域。该基于樟子松的防风固沙障包括阻沙网，所述阻沙网的两侧均设置有连接柱，每个所述连接柱的内部均开设有成线性阵列的缓冲槽，每个所述缓冲槽的内部均设置有用来连接阻沙网的...
- 刘喜东马雅莉石长春高荣杨涛李剑张海林庞东鹏
- 牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染
- 朊蛋白(Prion protein)是动物传染性海绵状脑病的致病蛋白,是由prnp基因编码的一种糖蛋白。牛的传染性海绵状脑病(BSE)俗称疯牛病,是一种严重危害人类健康和世界经济发展的传染性疾病。大量研究表明,该病的病原...
- 张海林
- 关键词：基因打靶同源重组朊蛋白牛胎儿成纤维细胞PRNP
- 文献传递
- 牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染被引量：3
- 2010年
- 利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一。将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力。本研究采用正负筛选策略,构建了牛prnp基因的双等位基因敲除载体,经内切酶Sac Ⅱ线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞,分别用600μg/mL G418、200nmol/mL Ganciclovir(GCV)进行正负药物筛选,最终获得了176个药物抗性细胞克隆,进一步采用PCR、测序、间接免疫荧光试验及Western blotting试验对细胞克隆进行鉴定,结果表明,其中的9个细胞克隆为中靶细胞,证明牛prnp基因被成功敲除。本研究为牛prnp的敲除提供了可行性依据,并为体细胞核移植生产敲除朊蛋白基因的转基因动物提供供体细胞。
- 张海林程胖兰杰宋永利张涌
- 关键词：基因打靶朊蛋白牛胎儿成纤维细胞PRNP间接免疫荧光BLOTTING
