孙世琪
- 作品数：232 被引量：238H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- 猪水泡病病毒HK′1/70株基因组全长cDNA的构建及其序列测定被引量：1
- 2007年
- 从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDVHK′1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3′PCR片段和5′PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体。利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5′PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3′PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK′1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定。结果表明,HK′1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5′NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3′NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾。在HK′1/70株全长cDNA序列的5′端引入了T7启动子序列,在poly A3′端引入了Psp1406Ⅰ识别序列。通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK′1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上。HK′1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础。
- 郑海学刘湘涛尚佑军张淼涛冯霞白兴文吴锦艳吕建亮孙世琪尹双辉郭建宏谢庆阁
- 关键词：猪水泡病病毒RACE全长CDNA克隆分子克隆
- 一种基于ORF2抗原功能区的检测猪圆环病的方法
- 一种基于ORF2抗原功能区的检测猪圆环病的方法，以PCV2 ORF2上的特定氨基酸区段(113-147aa)为目标，将其与GST融合表达得到GST-ORF2-E融合蛋白，利用亲和层析柱将融合蛋白纯化后作为抗原包被ELIS...
- 郭慧琛孙世琪刘湘涛尹双辉尚佑军殷宏才学鹏
- 文献传递
- 基于天蚕素D的新型抗病毒多肽对猪繁殖呼吸综合征病毒的抑制作用被引量：1
- 2025年
- 由猪繁殖呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引发的猪繁殖呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前危害养猪业的主要疾病之一。本研究旨在设计优化天然抗菌肽,筛选具有显著抑制PRRSV活性的抗病毒多肽,为PRRS防控制剂的研发提供新思路。以天蚕素D(cecropin D,CD)为母肽,通过氨基酸替换策略设计了CD-2、CD-3、CD-4这3个衍生物,利用固相合成技术合成CD及其衍生物,并使用质谱(mass spectrometry,MS)和反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)进行多肽的序列鉴定、纯化和纯度分析。通过圆二色谱研究多肽二级结构,使用CellTiter 96?AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒测定多肽细胞毒性。通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究多肽对PRRSV的抗病毒活性及作用阶段。MS以及RP-HPLC结果表明,CD及其衍生物被成功合成,且纯度高达95%。圆二色谱分析结果显示,CD衍生物在细胞膜模拟环境中表现出更稳定且丰富的α螺旋结构。细胞毒性测定结果表明,所有被测多肽在100μg/mL的工作浓度下的细胞毒性可忽略。多肽抗PRRSV的作用阶段试验结果显示,衍生多肽在病毒侵入阶段的抗病毒活性较母肽显著增强,说明通过引入赖氨酸、色氨酸和苯丙氨酸,增强了母肽的阳离子性和疏水性,进而增强了衍生多肽在侵入阶段的抗PRRSV活性。本研究结果为抗病毒多肽的应用及结构优化提供了理论基础,并为PRRSV的防控提供了新的思路。
- 臧浩月彭婕郭慧琛孙世琪曾巧英周静静
- 关键词：抗菌肽抗病毒活性猪繁殖呼吸综合征病毒
- O型口蹄疫病毒中和抗体液相阻断ELISA检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种O型口蹄疫病毒中和抗体液相阻断ELISA检测试剂盒及其应用。所述的液相阻断ELISA试剂盒中包含用作包被抗体的O型口蹄疫病毒中和抗体Ab1、用作反应抗原的O型口蹄疫病毒样颗粒抗原以及用作检测抗体的生物素标...
- 孙世琪张韵郭慧琛董虎李昊洲白满元尹双辉滕志东谭书桢吴金恩周静静魏甜丁耀忠
- 口蹄疫-塞内卡二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种口蹄疫‑塞内卡二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。本发明以口蹄疫(O型和A型)病毒样颗粒和塞内卡A型病毒样颗粒为抗原，制备新型二联病毒样颗粒疫苗，并通过确定配苗工艺、...
- 郭慧琛孙世琪宋河涛白满元丁耀忠尹双辉张韵董虎滕志东周静静吴金恩
- 猪细小病毒VLPs抗体检测试剂盒及其制备方法、应用
- 本发明公开了猪细小病毒VLPs抗体检测试剂盒及其制备方法、应用，其检测试剂盒包括预包被猪细小病毒VLPs的酶标板、封闭液、样品稀释液、酶结合物、浓缩洗涤液、酶底物溶液和终止液。本发明是首次采用猪细小病毒的病毒样颗粒作为包...
- 郭慧琛孙世琪白满元韩世充董虎宋品魏衍全张韵殷宏
- 文献传递
- 口蹄疫病毒多基因重组质粒在BHK-21细胞中的表达被引量：3
- 2003年
- 利用定点突变的原理 ,获得包含有口蹄疫病毒P1,2A ,3C及部分 2B编码区的目的基因片段 ,KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后 ,定向克隆于真核表达质粒载体pcDNA3 1(+) ,经筛选、鉴定及DNA序列分析后 ,将重组质粒pcDNA3.1 P12X3C转染BHK 2 1细胞 ,通过双抗体夹心ELISA方法和间接免疫荧光标记方法 ,检测细胞中表达的口蹄疫病毒抗原。结果表明 ,口蹄疫病毒基因片段正确克隆到真核表达质粒载体上 ,重组质粒pcDNA3.1 P12X3C可在BHK 2
- 郭慧琛刘在新孙世琪卢增军周广清祁淑云靳野刘湘涛谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒真核表达质粒细胞
- 一种耐热型口蹄疫重组病毒株及其在制备口蹄疫灭活疫苗中的应用
- 本发明公开了一种耐热型口蹄疫重组病毒株及其在制备口蹄疫灭活疫苗中的应用。本发明所述的一种耐热型口蹄疫重组病毒株，命名为rM10，其是由SEQ ID NO.1所示的感染性cDNA通过病毒拯救获得的。实验证明，该重组病毒株的...
- 郭慧琛孙世琪董虎卢源录张韵白满元吴金恩茹嘉喜尹双辉冯霞马军武
- 文献传递
- 犬细小病毒中和单域抗体的筛选及应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及犬细小病毒抗体的筛选及应用，尤其涉及犬细小病毒中和单域抗体的筛选及应用；具体公开了一种种犬细小病毒中和单域抗体或其抗原结合片段，所述中和单域抗体或其抗原结合片段的免疫原性风险低，能有效阻断...
- 郭慧琛孙世琪穆素雨谭书桢尹双辉董虎张韵王嘉宁白满元吴金恩滕志东
- 猪细小病毒的病毒样颗粒的制备及用途
- 本发明公开一种猪细小病毒的病毒样颗粒、其制备方法及应用。本发明的猪细小病毒的病毒样颗粒的制备方法是：对猪细小病毒VP2基因进行优化，得到优化的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的猪细小病毒VP2基因，将优化的VP2基...
- 郭慧琛孙世琪宋品董虎常艳燕魏衍全张韵茹嘉喜刘湘涛殷宏
- 文献传递
