南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室
- 作品数：27 被引量：95H指数：6
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- 寨卡病毒全基因组进化及变异情况分析被引量：1
- 2017年
- 目的通过构建寨卡病毒基因进化树以及比较氨基酸序列差异,了解寨卡病毒进化及基因变异情况。方法从GenBank获取1947年后各来源、各地区的寨卡病毒全基因组序列以及氨基酸序列,构建进化树并对氨基酸序列进行比较与分析。结果寨卡病毒非洲型与亚洲型毒株可各自聚类,2007年之后分离的毒株均为亚洲型;2016年分离自中国的14株寨卡病毒均为亚洲型,同源性高达99.1%~100.0%,氨基酸变异位点11个。结论寨卡病毒的分子进化与地理分布有密切的关系;2015-2016年分离的毒株同源性较高,序列较为保守;中国的14株毒株序列相近,其中1118、1875、2445以及2634 4个氨基酸位点可能对各自蛋白的结构和功能有较大的影响。
- 刘雨菁吴清华刘旭玲李盈余健海何晓恩覃直然陆维智李凌张宝赵卫
- 关键词：全基因组进化分析
- 肠出血型大肠埃希菌O104∶H4转运蛋白AatA单克隆抗体制备及鉴定
- 2017年
- 目的表达肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的融合蛋白GST-Aat A,获得单克隆抗体。方法人工合成肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的转运蛋白基因aat A,连接至p MDl8-T载体,转化E.coli DH5α,双酶切回收,构建原核表达质粒PGEX-6P-1-GST-Aat A,测序鉴定后,转化E.Coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达并纯化该重组蛋白。将纯化后的融合蛋白GST-Aat A免疫Balb/c小鼠,制备相应单克隆抗体;并对该单克隆抗体的纯度、亚型、效价、特异性进行鉴定和分析。结果构建的原核表达载体PGEX-6P-1-GST-Aat A能表达融合蛋白GST-Aat A;亲和层析纯化后融合蛋白GST-Aat A纯度达到95%,免疫小鼠后得到相应特异性单克隆抗体。结论成功制备出一株抗转运蛋白Aat A的单克隆抗体,该抗体为Ig G1亚型,特异性好,效价高,纯度可达97%。
- 邵娜李以圣王湘雨华颖万成松
- 关键词：抗体特异性
- 中东呼吸综合征冠状病毒ORF5及其突变型基因真核表达载体的构建与表达
- 2021年
- 目的对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)ORF5及其突变型基因进行真核表达载体的构建与表达,为进一步研究ORF5作用机制奠定基础。方法将MERS-CoV野生ORF5基因序列(KT036372),截短ORF5(ORF5△)基因序列(KT036373)以及融合ORF5(ORF5+)基因序列(KT036374)克隆至真核表达载体质粒pEGFP-N1中,构建目的基因与EGFP融合表达质粒。采用定点突变技术在ORF5与EGFP之间添加终止密码或移码突变,并将ORF5、ORF5△、ORF5+蛋白126位、136位起始密码子突变为终止密码子。将测序正确的质粒转染HEK-293T细胞,Western blot检测相应蛋白的表达情况。结果成功构建ORF5、ORF5△、ORF5+真核表达载体。ORF5与EGFP融合蛋白在荧光显微镜下可见强荧光,但Western blot仅能检出EGFP蛋白,未能检出完整的融合蛋白;当ORF5与EGFP之间加入终止密码或移码突变后,仍能够检出EGFP蛋白。ORF5△、ORF5+与EGFP融合蛋白成功表达,以EGFP为抗原,ORF5△、ORF5+可检出多种不同分子质量蛋白,126位终止后仍可检出多种不同分子质量蛋白,136位终止后ORF5△缺少1种目的蛋白。结论成功构建MERS-CoV野生、截短以及融合ORF5的真核表达质粒。野生ORF5蛋白表达机制复杂,该蛋白可能存在类似内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的特殊功能。变异体ORF5的表达存在多个翻译起始位点,其作用机制及功能需进一步研究。
- 张世豪黄姗陈嘉仪高静蔡金泰杨秀文赵卫张宝
- 关键词：真核表达载体构建
- RITA协同替莫唑胺抑制人脑胶质瘤U87细胞的生长被引量：6
- 2016年
- 目的探讨p53靶向小分子RITA,替莫唑胺(TMZ)以及二者联用对人脑胶质瘤细胞U87的增殖、克隆形成和凋亡等的影响及其可能机制。方法采用MTS法分别检测0、1、5、10、20μmol/L的RITA、TMZ和半剂量的RITA+TMZ作用于U87细胞0、24、48、72 h的细胞增殖情况,计算增殖率和抑制率,金正均法进行药物联用效果评价;q RT-PCR法和蛋白质印迹法分别检测p53和p21等肿瘤凋亡相关基因的m RNA和蛋白质表达水平;流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡;结晶紫染色检测细胞克隆形成。结果 MTS结果显示,RITA对U87细胞抑制作用明显,且显著强于TMZ(72 h,4个浓度对比P=0.000),1~20μmol/L的RITA、TMZ作用72h抑制率分别为25.94%~41.38%、3.84%~8.20%;二者联用细胞抑制率高于RITA(P<0.01)、TMZ单用(P=0.000),抑制率为29.21%~52.11%,抑制作用更显著。金正均法计算q值,半剂量RITA和TMZ联合给药48 h后,浓度高于5μmol/L时q值均大于1.2,药物联用表现为协同效应;RITA和TMZ均能促进p53,p21和puma等凋亡相关基因的表达,促进细胞凋亡,抑制细胞生长和克隆形成,且效果为RITA+TMZ>单用RITA>单用TMZ。结论 RITA可通过上调p53的表达发挥抑癌作用并提高人脑胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,使二者联用具有明显的协同作用。本研究为进一步深入探索RITA在脑胶质瘤治疗中的应用及与TMZ联用后药效提高机制提供了参考。
- 何小艳冯小丽宋鑫培曾焕超曹中栩肖维威张宝吴清华
- 关键词：人脑胶质瘤替莫唑胺肿瘤抑制
- MRI探究交叉韧带松紧度与髌股关节面损伤相关性的临床应用
- 2018年
- 目的探究交叉韧带松紧度与髌股关节面损伤程度的相关性,分析个体交叉韧带长度的解剖差异对髌股关节面损伤的影响,为预防和诊治髌股关节面疾病提供新的依据。方法随机收集南方医科大学珠江医院2016年10月至2017年12月110例膝关节MRI资料,磁共振矢状位上测量前、后交叉韧带长度A与B,测量前、后交叉韧带起止点距离La与Lb,计算交叉韧带松紧度M值;根据矢状位与冠状位上评判髌股关节面损伤程度0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与Ⅳ级并分别设5个组。通过SPSS20.0统计学软件,将所得数据进行One-Way ANOVA方差分析与Spearman相关性分析,探究交叉韧带松紧度与髌股关节面损伤程度的相关性。结果 One-Way ANOVA方差分析得出各组M值两两之间均存在显著性差异（P〈0.05）,Spearman相关性分析显示M值与髌股关节损伤程度间存在正相关性。结论交叉韧带松紧度与髌股关节面损伤存在相关性,随着M值越大,髌股关节面损伤程度越严重。
- 梁杰庄宁黄世嘉温思妮何晓恩陆维智刘成龙
- 关键词：交叉韧带磁共振成像
- 寨卡病毒检测技术研究进展
- 近年来寨卡病毒肆虐,引起全球广泛关注。由于寨卡病毒的血清学检测容易和其他黄病毒产生交叉反应,故急需建立特异有效的检测技术用于寨卡病毒病的防治和研究。本文介绍了寨卡病毒的特点,并对感染者不同检测样品的特性、核酸及免疫学检测...
- 覃直然陆维智赵卫
- 文献传递
- 埃博拉病毒快速检测技术研究进展被引量：2
- 2017年
- 埃博拉病毒(ebola virus,EBOV)是引起埃博拉病毒病(ebola hemorrhagic fever,EBHF)的病原体,属丝状病毒科。EBOV传染性强,致死率高;2014—2016年西非暴发埃博拉疫情共造成2.8万余人感染,1.1万余人死亡。早期、准确、灵敏的EBOV快速检测技术,可降低EBOV的传播风险。现从核酸检测及蛋白质检测技术两方面对EBOV快速检测的研究进展作一综述。
- 李以圣万成松
- 关键词：埃博拉病毒
- 亚洲型寨卡病毒实时荧光定量PCR检测方法建立被引量：3
- 2019年
- 目的分析亚洲型寨卡病毒基因组序列特征,建立亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR检测技术。方法通过分析亚洲型寨卡病毒全基因组核酸序列,选取亚洲型寨卡病毒的保守区设计引物和TaqMan探针,建立标准曲线并检测其特异性与敏感性。结果荧光定量PCR测试结果表明所设计的引物和探针特异性良好,对非洲型寨卡病毒、Ⅰ～Ⅳ型登革病毒和丙型肝炎病毒核酸检测无交叉反应;同时灵敏度较高,可达3.415×10~0 copies/μL;构建了标准曲线,回归方程为Y=–3.227 3logX+38.79,相关系数R^2=1,扩增效率E=102%。结论建立了一种检测亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR技术,可用于临床亚洲型寨卡病毒感染患者的病原分型、早期诊断及预防。
- 彭淑莹覃直然陈嘉雯余健海陆维智何晓恩朱利肖维威赵卫
- 关键词：实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 骨唾液酸蛋白对Caspase介导的RAW264.7细胞凋亡的抑制作用被引量：6
- 2017年
- 目的:探讨骨唾液酸蛋白(BSP)对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)介导破骨细胞前体RAW264.7凋亡中所起的作用。方法:培养破骨细胞前体RAW264.7,加信号通路相应抑制剂和(或)BSP处理后,用Caspase3/7/8/9检测试剂盒检测细胞Caspase3/7/8/9的活性,用Co-IP检测Caspase-8与整和素ανβ3是否存在相互作用。结果:BSP处理后RAW264.7细胞的Caspase-3/8/9活性下降,显著抑制了RAW264.7细胞的凋亡;而Caspase-8活性与Caspase-3活性存在正相关关系;且Caspase-8与整合素αvβ3存在相互作用。结论:BSP对RAW264.7细胞的抗凋亡作用主要通过调节外源性细胞凋亡途径来实现,并且由Caspase-8引起的细胞凋亡可因BSP与αvβ3的相互结合而抑制。
- 张彦石羽刘思念李奕韩超李凌
- 关键词：骨唾液酸蛋白RAW264.7CASPASE凋亡
- 非洲型寨卡病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立被引量：3
- 2018年
- 目的建立非洲型寨卡病毒(ZIKV)实时荧光定量PCR检测技术。方法人工合成非洲型ZIKV E基因上2 074～2 210 bp的保守片段,克隆到pUC57载体作为非洲型ZIKV质粒标准品;以108～102 copies/μl共7组质粒标准品制作标准曲线;设计的上游引物为5'-TCAAAGATGATGTTGGAGCT-3'、下游引物5'-CCTCTCACAGTGGCYTCA-3'、探针5'FAM-CCACCATTTGGGGATTCTTACATTGTC-BQ1-3',采用实时荧光定量PCR检测其特异性、灵敏度及重复性。结果非洲型ZIKV质粒标准品浓度为76.61 ng/μl;以非洲型ZIKV质粒标准品制作标准曲线,在2.47×(108～102)copies/μl之间有较好线性关系,Rsq为1;能特异检测出非洲型ZIKV质粒标准品,与登革病毒1～4、亚洲型ZIKV质粒标准品、HCV-1b病人血清RNA无交叉反应,检测限为2.47×101copies/μl。结论本研究建立了可用于非洲型ZIKV实验室检测的实时荧光定量PCR技术。
- 陈嘉雯覃直然彭淑莹余健海何晓恩谢茜朱利肖维威赵卫
- 关键词：实时荧光定量PCRE基因
