王平
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 动态比浊法测定A群流脑多糖中内毒素的含量
- 目的：对A群流脑多糖原液进行细菌内毒素含量检测，建立动态比浊法测定其内毒素含量的实验方法。
方法：通过对样品中定量添加标准内毒素的干扰试验，检测其回收率应在50％～200％范围。
结果：三批样品的回收...
- 李冶珊林海涛王雪薇王平刘钰刘梅影
- 关键词：流行性脑炎免疫学检验动态比浊法
- 文献传递
- 脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中A群游离多糖含量测定方法的建立
- 2014年
- 目的建立脑膜炎球菌结合疫苗中A群游离多糖含量的定量检测方法,并进行验证。方法采用高效阴离子色谱-电导法（high-performance anion-exchange chromatography with conductivity detection,HPAEC-CD）,分析柱：IonPacTMAS11 Analytical（4 mm×250 mm）,22 mmol/L Na OH流洗,流速为1 ml/min,25μl自动进样,电导检测。筛选样品的氧化反应最佳温度、双氧水浓度及干烤时间,确定HPAEC-CD的检测限和定量限,并进行专属性、准确性及精密度验证。应用建立的方法检测3批多糖蛋白结合物原液A-破伤风类毒素（A-tetanus toxoid,A-TT）多糖及游离多糖含量,并与《中国药典》三部（2010版）附录ⅦA磷测定法中的传统比色法进行比较;同时检测3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖及游离多糖含量。结果确定样品的氧化条件为：100μl/ml H2O2,220℃干烤90 min。磷标准品在0.1-1μg/ml范围内,峰面积和浓度线性关系良好（r=0.999 877）;TT、C-TT、W-TT及Y-TT对测定无干扰;该方法的检测限为0.007μg/ml,定量限为0.024μg/ml;A群脑膜炎球菌多糖原液的加样回收率在97.56%-102.95%之间;重复性及不同操作者间的精密度试验结果 RSD均小于5%。A-TT的多糖含量及游离多糖含量与传统比色法测定结果差异较小;3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖含量均符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》及《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》要求,游离多糖含量分别为24.31%、23.04%、24.44%和19.07%、17.80%、19.46%。结论采用H2O2氧化处理,HPAEC-CD检测,除了能对脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中微量A群多糖含量进行定量检测外,还能够进行游离多糖含量的检测。该方法灵敏度和精密度良好,操作简单、安全,对操作者及环境提供了保护。
- 王平林海涛焦小玲刘梅影
- 关键词：脑膜炎奈瑟菌结合疫苗
- 高效阴离子色谱-脉冲安培检测法测定脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量被引量：2
- 2014年
- 目的：采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）测定A群脑膜炎球菌多糖及脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中6-磷酸甘露糖胺的含量，并对该方法进行验证，实现微量A群脑膜炎球菌多糖的定量检测。方法：A群脑膜炎球菌多糖酸水解处理后，经^1H、^13C NMR及COSY谱图分析，产物结构为6-磷酸甘露糖胺单体，然后进样CarboPac PA10柱，氢氧化钠-醋酸钠梯度洗脱，脉冲安培检测。筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密度及准确性验证，并进行初步应用。结果：确定样品的水解条件为2 mol·L^-1三氟乙酸煮沸5 h。 载体蛋白破伤风类毒素对检测无干扰；在1～10 μg·mL^-1范围内，标准曲线线性关系良好（r 〉 0.999），加样回收率在95.73%～102.4%之间;试验内和试验间精密度试验结果RSD小于5%。 HPAEC-PAD法测定疫苗原液的多糖含量与Chen法比色测定结果相当，成品疫苗的A群多糖含量测定符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》（每剂均≥10 μg）和《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》（每剂均≥4 μg）。结论：HPAEC-PAD法专属性、精密度和准确性良好，可用于A群脑膜炎球菌多糖含量测定，尤其是脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量测定。
- 王平林海涛张燕斌焦小玲王雪薇刘梅影
- 关键词：脑膜炎球菌结合疫苗
- 层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖及其制备的多糖蛋白结合物的安全性和免疫原性被引量：1
- 2013年
- 目的采用层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖,以替代冷酚抽提法,并对制备的多糖蛋白结合物进行初步安全性和免疫原性评价。方法采用温和的表面活性剂去氧胆酸钠对C群脑膜炎球菌多糖进行前处理,并用Capto adhere和Capto DEAE阴离子交换凝胶柱串联,对多糖进行柱层析纯化,再通过脱盐去除残留的去氧胆酸钠,获得精制多糖。对缓冲液中的去氧胆酸钠浓度、缓冲液pH值、样品的前处理时间及离子交换流速进行优化,并对建立的层析纯化工艺进行放大,纯化3批多糖,按照《中国药典》三部(2010版)要求检测各项质控指标,并通过核磁共振-氢谱检测纯化后的多糖结构。将层析法和苯酚法纯化的多糖分别与破伤风类毒素结合,制备多糖蛋白结合物,对结合物进行异常毒性、小鼠急性毒性试验和免疫原性检测。结果经优化,确定缓冲液的去氧胆酸钠浓度为1.0%,pH值为8.0,样品前处理时间为6 h,离子交换流速为2.0 ml/min。放大工艺制备的3批C群脑膜炎球菌多糖各项检测指标均合格,多糖回收率均大于70%,明显高于苯酚法制备的多糖。核磁共振-氢谱显示,层析法与苯酚法纯化的多糖主要峰基本一致,层析法未改变多糖结构。层析法纯化的多糖制备的多糖蛋白结合物异常毒性试验合格,小鼠急性毒性试验结果与苯酚法纯化多糖制备的多糖蛋白结合物比较,差异无统计学意义(P>0.05),免疫小鼠后均具有良好的免疫原性。结论层析法分离杂蛋白操作简便,省时省力,工艺易于放大,且减少了对环境的污染,可替代苯酚抽提法用于C群脑膜炎球菌多糖的纯化。
- 王雪薇刘钰陈敬焦小玲王平张燕斌林海涛刘梅影
- 关键词：C群脑膜炎球菌多糖结合物安全性免疫原性
- B群链球菌42KD蛋白提取及免疫学效果初步探讨
- 目的：寻求一种以GBS菌体免疫原性蛋白为基础的疫苗方法以一步层析法从GBsⅢ型菌32325株中提取42KD菌体蛋白，以42KD蛋白不同剂量和针次免疫NIH成年小鼠，间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体滴度。
...
- 王平李向明王建华
- 关键词：B群链球菌结合疫苗蛋白免疫原性生物制品
- 文献传递
- 高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定W135群和Y群脑膜炎球菌多糖中半乳糖和葡萄糖含量被引量：4
- 2013年
- 目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsedamperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法多糖蛋白结合物原液的混合液经HCl水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测。筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用。结果确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1 h。载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰;重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5%;准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90%～110%之间。HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当;成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4μg/剂)。结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定。
- 李冶珊刘梅影陈敬林海涛王平
- 关键词：脑膜炎球菌多糖疫苗W135群多糖含量
