杨雨清
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
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- II型鲤疱疹病毒ORF4的多克隆抗体制备及其组织分布被引量：2
- 2017年
- 【目的】制备II型鲤疱疹病毒(Cy HV-2)ORF4多克隆抗体,利用免疫学方法研究ORF4编码蛋白在病毒感染过程中的组织表达特征。【方法】利用在线软件SMART和BLASTx分析Cy HV-2 ORF4序列,采用PCR技术从Cy HV-2基因组中扩增得到ORF4基因,克隆至表达载体PGEX-4T-3中,将获得的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Western blot鉴定,再利用亲和层析法纯化出重组蛋白。用纯化的重组ORF4蛋白免疫新西兰兔,收集兔血,分离兔血清获得抗ORF4蛋白的多克隆抗体,再利用Western blot检测抗体与ORF4蛋白之间的特异性。提取攻毒后的异育银鲫肌肉、脑、鳃、脾脏、肝胰脏、心脏、肾脏等组织DNA,用荧光定量PCR技术监测其病毒在各组织的复制水平。使用RIPA裂解液提取上述各组织总蛋白,再利用Western blot技术检测ORF4在感染Cy HV-2的异育银鲫各组织中的表达情况。【结果】原核表达的重组ORF4蛋白分子量为65 k D,与预期大小一致;获得的ORF4抗血清能特异性识别重组ORF4蛋白。病毒感染的异育银鲫体内ORF4主要表达在肾脏、脾脏和鳃上;荧光定量PCR证明Cy HV-2主要在肾脏、脾脏和鳃上富集。【结论】Cy HV-2的非结构蛋白ORF4可能参与病毒的复制,是病毒复制感染周期的特征性指示蛋白之一,这为深入研究ORF4在Cy HV-2感染过程中的作用机制提供参考。
- 晏文岩鲁建飞孔善云沈兆媛杨雨清吕利群许丹
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 药敏纸片法在水产动物临床用药中的快速应用与分析
- 以无乳链球菌、海豚链球菌、嗜水气单胞菌和水霉菌为测试菌株,用硫酸新霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、菌特灵、烟酸诺氟沙星、氟苯尼考、乳酸诺氟沙星、强力霉素、磺胺嘧啶、碘制剂、五倍子末、柠檬酸和复方生化黄腐酸分别对测试菌株根据简化...
- 周宏正陈垚曲王龙龙杨雨清王浩吕利群
- 关键词：药敏试验合理用药
