郭海红
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- DEK蛋白的真核表达纯化及其活性检测
- DEK蛋白是一种普遍存在的可磷酸化的染色质架构蛋白,主要定位于细胞核的常染色质区域。DEK蛋白有两个功能性的DNA结合域,一个是位于中心的SAP/SAF DNA结合域,另一个是位于羧基端的DNA结合域。羧基端存在多个可磷...
- 郭海红
- 关键词：杆状病毒表达系统
- 文献传递
- DEK蛋白真核表达纯化及其活性检测
- DEK蛋白是一种普遍存在的可磷酸化的染色质架构蛋白,主要定位于细胞核的常染色质区域。DEK蛋白有两个功能性的DNA结合域,一个是位于中心的SAP/SAF DNA结合域,另一个是位于羧基端的DNA结合域。羧基端存在多个可磷...
- 郭海红
- 关键词：杆状病毒活性检测
- 文献传递
- DEK蛋白的真核表达纯化及其活性检测被引量：1
- 2011年
- 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达DEK蛋白并进行纯化。首先以pFastBacI质粒构建重组质粒pFastBacI-DEK,转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-DEK,通过脂质体介导转染Sf9细胞产生具有强感染力的重组杆状病毒AcNPV-DEK。用此重组杆状病毒AcNPV-DEK感染Sf9细胞表达His-DEK融合蛋白。在非变性条件下,利用Ni-NTA agarose对表达的His-DEK融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting分析,在50 kDa处出现特异性蛋白条带并证实其为His-DEK融合蛋白。凝胶迁移阻滞实验表明,融合蛋白His-DEK与DNA的结合具有结构特异性,其与超螺旋型DNA结合活性强于与线性化DNA的结合活性。真核表达并纯化的融合蛋白His-DEK与DNA的结合活性要明显强于原核表达的融合蛋白His-CDB。DEK蛋白的磷酸化修饰会阻碍其与DNA的结合,而Sf9细胞中表达的融合蛋白His-DEK存在磷酸化修饰,将His-DEK去磷酸化后,其与DNA的结合活性有所提高。
- 郭海红杨辛郭芳胡红刚
- 关键词：杆状病毒表达系统
