刘娅梅
- 作品数：22 被引量：32H指数：4
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金江苏省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷对TNF-α诱导内皮细胞炎症的抑制作用
- 2013年
- 目的研究氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷(Mv-3-glc-Cl)对细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)所产生炎症的抑制作用。方法实验分为,空白组(DMSO)、10 g/L T NF-α刺激组、浓度为1、10、50、100 mol/L MV-3-gle-Cl+10 g/L TNF-α刺激组,通过ELISA方法检测细胞上清中可溶性单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白含量的变化;用实时荧光定量PCR检测细胞中MCP-1 mRNA表达量变化;Western blot检测IκBα蛋白含量的变化;通过免疫荧光方法测定核转录因子κB的核异位变化。结果 Mv-3-glc-Cl呈浓度依赖性的抑制细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MCP-1蛋白表达,其抑制作用可能与NF-κB信号通路有关。结论 Mv-3-glc-Cl对TNF-α诱导HUVEC的炎症反应起到抑制作用。
- 王健李春阳黄午阳郑其升刘娅梅
- 关键词：单核细胞趋化蛋白核转录因子KB
- 应用荧光定量PCR方法检测伪狂犬病病毒弱毒株在猪体组织中的分布
- 2023年
- 为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株免疫仔猪后可少量存在于大脑、小脑、肝脏、脾脏、肺脏、扁桃体和颌下淋巴结中,部分仔猪鼻甲骨病毒含量较高。应用本研究建立的荧光定量PCR方法阳性检出率为79.2%,而常规PCR方法阳性检出率仅为45.8%。结果表明,本研究建立的荧光定量PCR方法为了解弱毒株在猪体的分布提供了快速、敏感的检测手段。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪组织中的分布情况为进一步揭示其组织嗜性、安全性和免疫机制提供了数据。
- 许梦微朱来旭陈赛赛张传健张传健郑亚婷王志胜童玲曹瑞兵刘娅梅
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 几株伪狂犬病病毒的增殖特性与保存条件被引量：1
- 2020年
- 高滴度的抗原是制备优质疫苗的首要条件。对6株伪狂犬病病毒在仓鼠肾(baby hamster kidney,简称BHK)细胞和猪睾丸细胞(swine testicular,简称ST)细胞上的增殖效率进行了比较,同时测定不同保存温度和冻融条件对病毒滴度的影响。结果表明,几株伪狂犬病病毒在BHK细胞和ST细胞上增殖效率均很高,可达到生产要求。相较于ST细胞,各毒株在BHK细胞上出现病变时间更早。然而,所有毒株在ST细胞上的病毒滴度都高于同期在BHK细胞上的滴度。强毒株AH02LA株在2种细胞上滴度可达108.0 TCID 50/0.1 mL以上,表现为发生病变早,病毒增殖快,峰值到来早的特性。通过强毒株AH02LA株获得的基因缺失株LA-A株和自然传代缺失致弱株LA2017株峰值均达108.0 TCID 50/0.1 mL,展现出优良疫苗株的潜质。保存条件试验表明,PRV在-70℃保存30 d和4℃保存12 d内滴度相对稳定,而-20℃保存的病毒滴度下降明显。多次冻融后,滴度有所下降,相较于-70℃,-20℃条件下冻融病毒滴度下降更为显著,建议避免多次冻融。本试验结果可为PRV疫苗抗原在实际生产中制备与保存提供科学依据。
- 陈赛赛郑亚婷郭容利王志胜王志胜刘娅梅许梦微王彩楠刘娅梅
- 关键词：伪狂犬病病毒冻融
- 猪伪狂犬病病毒AH02LA株的分离鉴定及其对仔猪致病性研究被引量：12
- 2016年
- 从安徽六安某爆发伪狂犬病猪场送检的流产仔猪脑组织样品中分离获得1株病毒,经鉴定为伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）,命名为PRV AH02LA株。PRV AH02LA株的糖蛋白g D和g I基因序列与2011年以来我国分离的变异株同源性最高（99.5%~100%）,而与其他毒株同源性低。该分离株在BHK21细胞上增殖能力强,最高滴度达到109.0TCID50/m L。该分离株对4~5周龄和9~10周龄的PRV阴性猪能引起100%发病和死亡。临床上4~5周龄猪有严重的神经症状,也有明显的呼吸道症状;而9~10周龄猪主要表现呼吸道症状。说明本研究分离获得的PRV AH02LA是一株伪狂犬病毒变异株,其对仔猪的致病力较强。
- 乔永峰顾一奇柳畅呙荣兵许梦微王志胜刘娅梅郭容利刘芳侯继波王继春
- 关键词：伪狂犬病病毒变异株糖蛋白D
- 火鸡疱疹病毒亚克隆对活载体疫苗性能影响的研究
- 2025年
- 旨在比较火鸡疱疹病毒(HVT)亚克隆对构建活载体疫苗的影响。本研究采用同源重组方法,在HVT Fc126的UL55与UL56基因间的非编码区插入MiniF序列,构建重组病毒;采用细菌人工染色体(BAC)技术,分别提取病毒DNA后转入DH10B感受态细胞中,构建3个对应的BAC;将传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2表达盒分别与3株BAC的DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行重组病毒的拯救;将重组活载体、亲本毒株及商品化重组活载体的生长动力学进行比较;将3株重组活载体接种SPF鸡后,在免疫后第3、4、5、6周等共4个时间点采集血清进行琼脂扩散试验。结果:获得3个纯化的HVT-MiniF亚克隆病毒,然后获得3株对应的HVT BAC,分别命名为HVT BAC-C1、HVT BAC-C2和HVT BAC-C3。限制性片段长度多态性(RFLP)鉴定发现这3个BAC亚克隆的基因组主体序列几乎一致,略有差异;进一步获得3株相对应的VP2重组HVT活载体,分别命名为HVT-VP2-C1、HVT-VP2-C2、HVT-VP2-C3;生长动力学结果表明,3株VP2重组病毒与2株对照病毒的滴度在6、24、36和72 h存在显著性差异(P<0.05),在12和48 h无明显差异(P>0.05);琼脂扩散试验结果发现3个亚克隆的重组病毒均能产生较高抗体,但都没有达到对照商品疫苗的水平;3个亚克隆重组病毒之间产生的抗体存在明显差异,其中HVT-VP2-C2免疫鸡后产生的抗体最高。综上,HVT在传代过程中可能易出现基因变异,提示在构建重组活载体疫苗时,应充分考虑不同亚克隆活载体的免疫效力差异,做好种毒纯化。
- 谢丽华王志胜王志胜栗环环郑亚婷刘娅梅张传健刘娅梅Armando Mario DAMIANI张传健黄腾郭容利
- 关键词：火鸡疱疹病毒亚克隆活载体疫苗细菌人工染色体免疫效力
- 猪源伪狂犬病病毒变异株传代致弱株LA2017株的获得与鉴定
- 2021年
- 将猪源伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的强毒变异株AH02LA株在鸡胚成纤维细胞上进行连续传代,获得了不同代次的弱毒株,检测其安全性、免疫效力、生长特性及稳定性,并对其gE基因上、下游片段进行测序。对PRV AH02LA株的F151代进行3轮挑斑纯化,获得了1个毒株并将其命名为PRV LA2017株。用该毒株接种(剂量为106.00TCID50/头)试验猪,在接种后14 d内无任何临床症状;在免疫(106.00 TCID50/头)后21 d攻毒(106.50TCID50/头),所有试验猪未出现任何猪伪狂犬病症状,体温正常,没有排毒。在攻毒前用ELISA检测,PRV gB抗体全部为阳性,PRV gE抗体全部为阴性;在攻毒后14 d这两种抗体均为阳性,体现出良好的安全性与保护性。对照组BarthaK61在攻毒后试验猪全部发病,体温高至40.5℃以上,且均检出排毒。测序结果显示LA2017株的gI部分基因与gE全部基因缺失。该毒株在CEF细胞及ST细胞上生长良好,在CEF上的滴度达到108.0TCID50/mL,在ST细胞上的滴度最高达109.5TCID50/mL,能满足活疫苗生产的要求。LA2017株安全性好,免疫效力强,生长滴度高,可以作为研制针对PRV变异株疫苗的候选毒株。
- 郑亚婷郭容利陈赛赛乔永峰乔永峰许梦微王志胜张传健许梦微王继春
- 关键词：变异株基因缺失免疫效力
- 伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株及其应用，属于动物医学的疫苗领域。伪狂犬病病毒LA1206‑80株，保藏编号为：CGMCC No.14329。本发明还提供伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株在制备伪狂犬病疫苗中的应用、一种...
- 王继春宋增财郭容利乔永峰王志胜许梦微刘娅梅郑亚婷范红杰侯继波
- 一种新型火鸡疱疹病毒的细菌人工染色体、构建方法与应用
- 本发明提供一种新型火鸡疱疹病毒的细菌人工染色体、构建方法与应用，涉及动物医学领域。所述细菌人工染色体,是将HVT基因组中的gC基因敲除，并替换为mini‑F质粒序列。所述细菌人工染色体的构建方法：扩增HVT基因组中gC基...
- 王继春王志胜许梦微刘芳乔永峰刘娅梅侯继波
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其应用，属于动物医学疫苗领域。所述疫苗株，是将伪狂犬病病毒Bartha K61株基因组中的gC基因替换为伪狂犬病病毒AH02LA株的gC基因、gD基因替换为伪狂犬病病毒AH02L...
- 王继春刘娅梅张传健陈赛赛乔永峰呙明鹏王志胜许梦微郑亚婷郭容利侯继波
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用，属于动物医学的疫苗领域。该伪狂犬病病毒传代致弱毒株，是伪狂犬病病毒LA2017株，保藏编号为CGMCC No.18170。本发明还提供所述伪狂犬病病毒传代致弱毒株在制备伪狂犬病...
- 王继春陈赛赛郭容利乔永峰王志胜许梦微郑亚婷刘娅梅张传健吕家轩
- 文献传递
