王宝权
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省高等学校优秀人才支持计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Nup88-shRNA对人结肠癌细胞株HT-29生长及侵袭力影响的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的构建重组慢病毒介导的Nup88-sh RNA载体,由RNA干扰(RNAi)技术沉默Nup88,研究其对结肠癌HT-29细胞的增殖、黏附、侵袭和转移的影响,为结肠癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法 Nup88重组慢病毒载体的构建后包装检验效价,以最佳感染复数转染结肠癌HT-29细胞,实验分为沉默组、阴性对照组和空白组3组,其中沉默组分为Nup88-sh RNA1、Nup88-sh RNA2、Nup88-sh RNA3、Nup88-sh RNA4 4个亚组。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹检测各组表达效率,主要是HT-29细胞的m RNA和蛋白;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞侵袭力的影响。结果沉默4组病毒及1组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8 TU/m L。沉默组Nup88 m RNA与阴性对照组和空白组相比,蛋白表达差异均有显著统计学意义(P<0.01)。Nup88-sh RNA1转染后,沉默率可达到86%。沉默组细胞增殖程度显著减少,与空白组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组细胞凋亡率(30.28%±0.19%)显著增加,与阴性对照组(4.15%±0.24%)和空白组(2.98%±0.27%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。培养肿瘤细胞常规24 h后,沉默组穿膜细胞数(120.5±8.7)和抑制率(49.22%)与阴性对照组(232.2±13.4,-2.14%)和空白组(276.4±10.2,0)相比,穿膜细胞数明显减少,抑制率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Nup88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制HT-29细胞中Nup88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。
- 李男胡占升王宝权孙宏治朱志图李玉强李谌王钰
- 关键词：NUP88RNA干扰(RNAI)慢病毒载体
