张歧山
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- 醛酮还原酶AKR7A1在活性醛引起的V79-4细胞损伤中的作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨醛酮还原酶AKR7A1在活性醛引起的细胞损伤中的作用。方法采用AKR酶活性实验检测外源性AKR7A1蛋白在V79-4中国仓鼠肺细胞中的催化活性,使用caspase-3活性实验和基因突变致畸实验检测在V79-4细胞中过表达AKR7A1对活性醛引起的细胞凋亡和致畸作用的影响。结果 AKR酶活性实验结果显示:转染AKR7A1的V79-4细胞内还原酶活性显著升高,表明稳定表达的AKR7A1具有催化活性。caspase-3活性实验结果显示:稳定表达AKR7A1的V79-4细胞经10μmol/L丙烯醛处理后,caspase-3活性显著低于对照细胞。致畸实验结果显示:表达转空载体的V79-4细胞在4-羟基壬烯醛处理后的突变率显著高于稳定表达AKR7A1的V79-4细胞。结论稳定表达醛酮还原酶AKR7A1能显著提高V79-4细胞对丙烯醛引起的细胞凋亡和4-羟基-2-壬烯醛引起的致畸作用的抵抗力。
- 李丹马东初张歧山刘融
- 关键词：细胞凋亡醛酮还原酶致畸作用
- 人源醛酮还原酶7A2融合蛋白的纯化及其对苯代谢产物的催化活性被引量：2
- 2013年
- 目的使用FPLC系统纯化人源醛酮还原酶(AKR)7A2融合蛋白,并检测纯化的AKR7A2蛋白对苯的代谢产物的催化活性。方法将含有His-AKR7A2的重组质粒转化至BL21大肠杆菌,通过IPTG诱导AKR7A2融合蛋白的大量表达;利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱和G25 Sephadex凝胶色谱柱纯化AKR7A2融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定。采用酶活性实验检测纯化的重组AKR7A2蛋白对苯甲醛、双苯醌和反向,反向-2,4-二烯-1,6-己二酮(MUC)的底物特异性。结果使用FPLC系统通过两步纯化法成功获得重组的His-AKR7A2融合蛋白,纯度高达98%。酶活性实验结果显示:重组AKR7A2蛋白对苯甲醛有中等亲和力,对MUC亲和力较高,对双苯醌的亲和力较低。结论成功纯化了重组人源AKR7A2蛋白,并检测了其对3种苯代谢产物的底物特异性,AKR很可能在苯的代谢途径中扮演重要角色。
- 李丹初阳刘雅茹张歧山秦勇
- 关键词：醛酮还原酶蛋白纯化底物特异性
