李秀鹏
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 过量表达枯草芽孢杆菌乙偶姻还原酶提高2,3-丁二醇产量被引量：5
- 2016年
- 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168是一株安全生产的菌株,但是在2,3-丁二醇(2,3-BD)的发酵过程中,会积累较多的副产物乙偶姻(AC)。乙偶姻还原酶是催化AC合成2,3-BD的关键酶。为了提高2,3-BD合成效率,首先将乙偶姻还原酶基因acr克隆到B.subtilis 168,构建了重组菌B.subtilis 168/p MA5-acr。对重组菌进行摇瓶发酵实验,结果表明,相比出发菌,重组菌的2,3-BD产量和转化率分别提高28.62%和22.87%,主要副产物AC积累量下降了20.01%。同时,分支路径的副产物甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸,也有不同程度的降低。
- 李秀鹏杨套伟徐美娟张显饶志明
- 关键词：2,3-丁二醇乙偶姻枯草芽孢杆菌
- 以葡萄糖为底物一步法合成γ-氨基丁酸整合型重组钝齿棒杆菌的构建被引量：4
- 2013年
- 【目的】为了构建一株直接利用廉价的葡萄糖合成γ-氨基丁酸的重组钝齿棒杆菌,将来自于植物乳杆菌γ-氨基丁酸合成途径的关键酶谷氨酸脱羧酶基因(lpgad)在产谷氨酸菌株钝齿棒杆菌中进行整合表达,实现葡萄糖到GABA的一步法生产。【方法】运用PCR技术扩增得到带有tac启动子的谷氨酸脱羧酶基因tacgad。通过重叠PCR的方法获得钝齿棒杆菌精氨酸合成途径关键酶N-乙酰谷氨酸激酶(NAGK)基因内部缺失型基因ΔargB。利用自杀载体pK18mobsacB构建同源整合载体pK18-ΔargB::tacgad,以ΔargB的上下游序列为同源臂,通过两次同源重组将tacgad基因整合到钝齿棒杆菌基因组,同时将NAGK基因argB灭活,利用蔗糖致死基因sacB反向筛选标记筛选得到谷氨酸脱羧酶的重组钝齿棒杆菌C.crenatumΔargB::tacgad。重组钝齿棒杆菌以葡萄糖为底物进行发酵,测定GABA含量。【结果】重组菌C.crenatumΔargB::tacgad成功表达谷氨酸脱羧酶,同时阻断了精氨酸合成途径对谷氨酸到GABA代谢途径的竞争,粗酶液基本检测不到NAGK活性,发酵液无精氨酸合成。通过96 h发酵,重组菌可积累约8.28 g/L的GABA。【结论】本研究通过将谷氨酸脱羧酶基因定向整合到钝齿棒杆菌精氨酸合成途径的关键酶基因argB内部,成功表达谷氨酸脱羧酶的同时阻断竞争途径精氨酸的合成。本研究为实现直接利用葡萄糖合成GABA的一步法生产奠定了基础。
- 孙红梅饶志明李秀鹏徐美娟张显许正宏
- 关键词：Γ-氨基丁酸钝齿棒杆菌同源重组谷氨酸脱羧酶
