目的探索中药制剂蜈蚣败毒饮通过干预自噬相关途径脑Ras同源蛋白(ras homolog enriched in brain,Rheb)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)进而影响皮肤组织中组织驻留记忆T细胞(tissue-resident memory T cells,T_(RM))的表达和分泌来改善银屑病复发的机制。方法采用咪喹莫特二次诱导法制备30只复发型银屑病小鼠模型,将其分为6组,每组5只,分别为空白组、模型组、甲氨蝶呤组(3.6×10^(-4)g/kg)及蜈蚣败毒饮低、中、高剂量组(7.93、15.85、31.7 g/kg)。记录造模过程中小鼠皮损变化,并观测灌胃后鼠银屑病面积和严重程度指数(mice psoriasis area and severity index,MPASI)评分;采用马松三色染色(masson staining,Masson)和天狼星红染色法观察小鼠皮损真皮层中胶原纤维的状态;采用蛋白印迹(western blot,WB)实验及免疫组织化学染色检测小鼠皮损组织中Rheb、mTOR蛋白及磷酸化(phosphorylated,p)-Rheb、p-mTOR蛋白的表达及分布情况;采用流式细胞术检测小鼠皮损组织中T_(RM)细胞的表达情况;采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血清中T_(RM)细胞主要分泌因子白细胞介素(interleukin,IL)-17、IL-22、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的含量。结果咪喹莫特二次诱导时银屑病样皮损出现时间显著早于一次诱导(2 d<4 d),且复发型银屑病模型的皮损表现更为严重。与空白组比较,模型组的MPASI分值明显增高[(26.40±2.55)分vs.(0.00±0.00)分],皮损组织中大量胶原纤维溶解,肌纤维排列混乱,炎细胞浸润明显,其皮损中的p-Rheb、Rheb、p-mTOR、mTOR蛋白均受到不同程度的抑制,自噬反应的发生导致皮损中T_(RM)细胞表达呈现活跃状态[(392.60±35.62)个vs.(25.40±3.56)个],分泌大量的IL-17[(493.27±35.53)pg/mL]、IL-22[(407.87±24.53)pg/mL]、IFN-γ[(242.38±13.29)pg/mL]导致银屑病复发且皮损加重。与模型组比较,蜈蚣败毒饮低、中、高�
目的探究益气活血化瘀汤对慢性肾衰竭(CRF)大鼠钙磷代谢紊乱及血管钙化的影响及其相关机制。方法将50只大鼠随机分为5组:假手术组、肾衰组、低剂量组、高剂量组和骨化三醇组,每组10只。采用5/6肾切除法复制CRF大鼠,假手术组不切除肾脏。模型复制成功2周后开始灌胃益气活血化瘀汤:低剂量组8.8 g/kg,高剂量组35.2 g/kg;骨化三醇组灌胃骨化三醇25 ng/kg;假手术组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续8周。肾衰组未做任何处理。给药结束后,代谢笼收集大鼠24 h尿液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿蛋白(UP)、甲状旁腺激素(PTH)、血清肌酐(Scr)、成纤维细胞生长因子23(FGF-23)与25-羟维生素D325(OH)D;全自动生化仪检测血钙、血磷;化学显色法检测血尿素氮(BUN)。采用茜素红对大鼠主动脉进行大体染色和切片染色,观察血管钙化结节。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测结肠腺瘤样息肉蛋白(APC)、T细胞因子4(TCF4)、β-catenin mRNA和蛋白相对表达量。结果与肾衰组比较,低剂量组、高剂量组和骨化三醇组血钙、25(OH)D;升高(P<0.05);高剂量组和骨化三醇组血钙、25(OH)D;高于低剂量组(P<0.05);骨化三醇组血钙、25(OH)D;高于高剂量组(P<0.05);与肾衰组比较,低剂量组、高剂量组和骨化三醇组血磷、PTH、BUN、Scr、24 h UP、FGF-23降低(P<0.05);高剂量组和骨化三醇组血磷、PTH、BUN、Scr、24 h UP、FGF-23低于低剂量组(P<0.05);骨化三醇组血磷、PTH、BUN、Scr、24 h UP、FGF-23低于高剂量组(P<0.05)。假手术组均未见红色钙化结节;肾衰组可见大面积红色钙化结节,呈弥散式分布;相比于肾衰组,低剂量组、高剂量组和骨化三醇组的钙化出现不同程度减轻。与肾衰组比较,低剂量组、高剂量组和骨化三醇组APC m RNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);高剂量组和骨化三醇组APC mRNA和蛋白相对表达量高于低
