韩世伟
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组外源性人热休克蛋白70基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2010年
- 背景:热休克蛋白70的肿瘤免疫作用近年来受到国内外学者的广泛关注,然而目前常用的诱导内源性热休克蛋白70表达的方法,如热应激、缺血预处理等均存在一些弊端。目的:拟构建携带并正确表达外源性人热休克蛋白70基因的重组真核表达载体。方法:外源性热休克蛋白70基因连接入真核表达载体pDC315-EGFP中,转化大肠杆菌感受态细胞,重组真核表达载体外源基因测序及PCR检测鉴定阳性克隆后转染人胚肾293细胞,荧光显微镜及western blot鉴定外源基因在细胞中的表达。结果与结论:经PCR和测序证实外源性人热休克蛋白70基因正确重组入真核表达载体pDC315-EGFP,转染293细胞后荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白GFP的表达,Western blot检测到热休克蛋白70在293细胞中有效表达。
- 韩世伟张阳德万小平陈玉祥
- 关键词：热休克蛋白70真核表达载体基因载体基因重组
- 纳米磁流体介导的重组pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性肝癌细胞HepG2的杀伤作用的体外实验被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨纳米磁流体介导的重组质粒pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2的杀伤作用。方法:通过纳米磁流体将构建好的重组质粒pEGFP-AFP-TK并分别转染AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性肝癌细胞SMMC-7721,于荧光显微镜下动态观察;使用RT-PCR和Western blot分析HepG2细胞中TK基因的表达情况,MTT法检测转染重组TK表达质粒后的细胞在更昔洛韦(GCV)作用下的存活率并观察旁观者效应,用流式细胞术分析HepG2细胞的凋亡。结果:纳米磁流体能将重组质粒pEG-FP-AFP-TK转入AFP阳性的HepG2细胞,其转染效率高于脂质体;RT-PCR及Western blot证明转染的AFP阳性的HepG2细胞有TK基因的表达;MTT及流式细胞术分析说明TK基因发挥杀伤细胞作用。结论:纳米磁流体能将重组质粒pEGFP-AFP-TK转染HepG2细胞并获得表达,可作为肝癌基因治疗的基因载体,采用AFP增强子可使目的基因在HepG2细胞中特异性表达,并且在前药GCV的作用下,能使AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2发生凋亡及旁观者效应。
- 罗勇张阳德彭健颜焕新薛敦吴凯周琳韩世伟赵劲风
- 关键词：AFPTK基因GCV
