张梅
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达叶酸受体α的C26细胞株的建立
- 2015年
- 目的建立稳定表达叶酸受体α(FRα)的C26细胞,用于FRα基因疫苗的后续研究。方法采用脂质体转染法,将前期构建的重组真核表达质粒pc DNA3.1-FRα基因导入C26细胞,用G418加压进行筛选,并通过单克隆操作,建立稳定转染叶酸受体α基因的单克隆细胞株。利用反转录PCR及免疫荧光细胞化学染色检测稳定转染细胞中叶酸受体α基因的表达情况,并利用反转录PCR检测传代细胞中FRα基因表达的稳定性。结果经转染、G418筛选以及单克隆化操作,得到单克隆FRα基因稳定转染细胞株,所得单克隆稳定转染细胞株可表达FRαmRNA及蛋白,并能够在多次传代后保持表达的稳定性。结论成功构建了FRα稳定转染细胞株。
- 邱郑邢黎军刘欣欣张梅张芳王旻
- 关键词：叶酸受体Α稳定转染细胞株
- 叶酸受体α原核载体的构建及表达被引量：3
- 2016年
- PCR法扩增叶酸受体α基因片段,经NcoⅠ和EcoRⅠ双酶切后克隆到原核表达载体pet22b,并进行双酶切和测序鉴定;将测序正确的重组质粒通过Ca Cl2法转入BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE,Western blot和ELISA鉴定蛋白表达;免疫小鼠,血清效价检测蛋白免疫原性。经双酶切和测序验证,成功构建FRα-pet22b表达载体。Western blot验证表明,叶酸受体α基因能在BL21中表达目的蛋白,但ELISA值较低。经免疫后小鼠血清与市售叶酸受体α亲和力差,预示原核表达虽能得到叶酸受体α,但其构象可能与真核表达蛋白不同。
- 张梅邱郑邢黎军强旭张娟王旻
- 关键词：叶酸受体Α原核表达蛋白鉴定构象
