目的:观察干扰胰岛素样生长因子-Ⅰ型受体(insulin-like growth factor-Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)表达对肝癌(PLC/PRF/5及Bel-7404)细胞增殖、周期、凋亡的影响及联合抗癌、靶向药物抑制细胞增殖的协同作用.方法:设计与合成多条针对IGF-ⅠR序列的shRNA,插入pGPU6/GFP/Neo载体,构建、转染肝癌细胞株、筛选高效质粒,观察沉默IGF-ⅠR表达对肝癌细胞增殖的抑制作用与机制.结果:4对构建IGF-ⅠR-shRNA经筛选以s h R N A 4干扰效果最佳且具特异性;以shRNA4转染效率PLC/PRF/5细胞为71%和Bel-7404细胞为90%;在mRNA水平上抑制率前者为59.6%±2.8%,后者为54.9%±2.6%;蛋白水平上IGF-ⅠR表达均同步减少;转染72h后,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率为63.87%±3.90%(t=19.244,P<0.001)及Bel-7404细胞为61.47%±1.70%(t=5.493,P<0.005),均呈时间依赖性,且增殖周期发生G1期阻滞,细胞周期蛋白(CyclinD1)表达受抑,细胞凋亡增加;shRNA4增加肝癌细胞对靶向药物索拉非尼及化疗药物奥沙利铂的敏感性.结论:下调IGF-ⅠR基因转录可抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡,改善肝癌细胞对靶向药物及化疗药物敏感性,提示IGF-ⅠR有望成为肝癌基因治疗的有效靶点.
