目的研究BTB/POZ(broad complex,tramtrack and bric a brac/poxviruses and zinc finger)基因对乳腺癌细胞系增殖能力的影响。方法以人脾脏c DNA文库为模板,p CMV-HA-Vector为载体,构建真核表达载体p CMV-HA-BPOZ;免疫印迹实验鉴定重组蛋白p CMV-HA-BPOZ的表达;细胞生长实验检测BPOZ对细胞增殖能力的影响;平板克隆实验检测BPOZ对细胞生长能力的影响。结果免疫印迹实验结果证实,构建的真核表达载体p CMV-HA-BPOZ能正确表达;过表达HA-BPOZ可显著抑制MCF7和ZR-75-1细胞的增殖和生长。结论成功构建了真核表达载体p CMV-HA-BPOZ,并在细胞中成功表达;BPOZ可明显抑制MCF7和ZR-75-1细胞的增殖和生长能力,为进一步研究BPOZ在乳腺癌发生发展中的作用打下基础。
目的研究环指蛋白34(RING finger protein 34,RNF34)对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID和pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒,并在HEK293T细胞中瞬时表达;利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒(SeV)和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒;发现在SeV刺激下,RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用,RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性,RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。
