为研究转化生长因子β1(TGF-β1)对脂多糖(LPS)刺激小鼠乳腺上皮细胞(MECs)分泌炎症因子的影响,本实验利用si RNA转染技术干扰MECs TGF-β1基因,采用荧光定量RT-PCR方法筛选最佳转染条件,并检测其干扰后LPS介导其下游信号smad3 m RNA的表达量,采用ELISA法检测其下游信号smad3蛋白含量和LPS介导细胞分泌前炎症细胞因子TNF-α和IL-6的含量。结果显示,选用50 n M浓度的TGF-β1-mus-1212片段转染组能够极显著抑制TGF-β1的m RNA表达(p<0.01);TGF-β1被干扰后,LPS刺激其下游smad3 m RNA的表达量与对照组相比呈显著性降低(p<0.05),smad3蛋白含量与对照组相比均极显著性降低(p<0.01);细胞分泌TNF-α的量与对照组相比显著降低(p<0.05),分泌IL-6的量各组无变化(p>0.05)。本实验结果表明干扰TGF-β1能降低LPS诱导乳腺上皮细胞TNF-α的分泌量,因此TGF-β1可作为靶基因深入研究乳腺上皮细胞的免疫功能,本研究为乳腺炎症、肿瘤等乳腺相关疾病的治疗提供新的思路及实验数据,为新药的开发和应用提供理论依据。
为了评价家畜止痢散的抗腹泻作用,试验采用限度试验中最高剂量为按每千克体重5 g 1次灌胃给药,观察、记录死亡数并计算半数致死量(LD50);采用番泻叶致小鼠腹泻模型观察止痢散的抗腹泻效果及其对正常或新斯的明致胃肠痉挛小鼠肠推进率和胃残留率的影响。结果表明:急性毒性试验各剂量组均无小鼠死亡,无法计算LD50,可认为该药无毒;与模型组相比,止痢散低、中剂量组可显著减少小鼠腹泻次数(P<0.05);与正常空白组相比,止痢散低、中、高剂量组都对小鼠肠推进运动有极显著抑制作用(P<0.01),中剂量组对正常小鼠胃排空有极显著抑制作用(P<0.01);而与新斯的明致胃肠痉挛模型组相比,止痢散高、中、低剂量组对小鼠肠推进运动和胃排空都没有显著的抑制作用(P>0.05)。说明止痢散具有抗腹泻的作用与其抑制胃肠运动有关,但其不能对抗痉挛的胃肠运动。
为探究Ilk对LPS诱导小鼠乳腺上皮细胞(MECs)分泌炎性因子IL-8、TNF-α的影响,采用siRNA技术筛选最佳转染条件,q PCR法和ELISA法检测siRNA转染后下游蛋白Akt1的表达来评价Ilk沉默,ELISA法检测Ilk沉默后对小鼠MECs分泌炎性因子IL-8、TNF-α的影响。结果显示:选用Ilk-mus-595片段的20 n M转染组可极显著抑制Ilk的mRNA表达(P<0.01),转染效率最好,达84.83%;Ilk转染后可显著减少LPS介导的Akt1 mRNA的转录和蛋白表达(P<0.05);可显著减少LPS介导的TNF-α分泌(P<0.05),但各组IL-8的量无变化(P>0.05)。结果提示:利用siRNA成功转染的Ilk可以影响细胞内Akt1的表达,降低细胞分泌的TNF-α含量,Ilk可能与小鼠MECs的抗炎有关,可作为靶基因进行更加深入的研究,以期为乳腺炎症的治疗提供新的思路及数据参考。
