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陈健康

作品数：5 被引量：10H指数：2
供职机构：武警总医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 2篇肿瘤
  • 2篇肿瘤转移
  • 2篇细胞
  • 2篇小鼠
  • 2篇肝细胞
  • 1篇蛋白
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达质粒
  • 1篇质粒
  • 1篇天然免疫
  • 1篇重组质粒
  • 1篇转录
  • 1篇转录水平
  • 1篇免疫
  • 1篇基因
  • 1篇基因敲除
  • 1篇核表达
  • 1篇干扰素
  • 1篇干扰素Β

机构

  • 4篇军事医学科学...
  • 4篇武警总医院
  • 1篇安徽医科大学
  • 1篇安徽大学
  • 1篇广西医科大学...
  • 1篇吉林大学
  • 1篇首都医科大学...

作者

  • 5篇陈健康
  • 3篇何湘
  • 3篇杨晓莉
  • 3篇钟辉
  • 2篇刘元明
  • 2篇魏从文
  • 2篇朱永杰
  • 2篇周鹏宇
  • 1篇曹叶
  • 1篇王贝晗
  • 1篇刘丽萍
  • 1篇吴飞翔
  • 1篇梁慧
  • 1篇张丹浩
  • 1篇王莉
  • 1篇张景
  • 1篇张萍萍

传媒

  • 2篇生物技术通讯
  • 2篇军事医学
  • 1篇中华肿瘤杂志

年份

  • 2篇2017
  • 3篇2016
共 5 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
利用CRISPR/Cas9系统构建H22细胞GP73基因敲除稳定株及功能鉴定被引量：3
2016年
目的利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除小鼠源肝癌细胞H22中的GP73基因,构建H22细胞GP73基因敲除的稳定细胞株。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计2条特异性识别GP73基因启动子的上下游sgRNA,利用载体p X459质粒,构建2对重组真核表达质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染至H22细胞内,使用嘌罗霉素加压筛选稳定敲除GP73的H22细胞株,利用免疫印迹检测重组质粒对内源GP73的敲除效果。MTT实验检测GP73被敲除后对细胞增殖能力的影响,再利用划痕实验检测细胞的迁移能力。结果免疫印迹结果说明敲除GP73基因的小鼠源H22细胞株内无GP73蛋白的表达;并且GP73被敲除后,H22细胞的增殖能力和迁移能力减慢。结论通过CRISPR/Cas9系统获得了靶向GP73基因的重组质粒,并且筛选出了稳定干扰GP73表达的细胞株,从而为探讨GP73在肝癌发生中的作用奠定基础。
陈健康魏从文梁慧王贝晗钟辉杨晓莉
关键词：GP73基因敲除
小鼠GP73蛋白真核表达质粒的构建及其对mTOR转录水平的影响被引量：1
2016年
目的:构建小鼠高尔基蛋白73(m GP73)的真核表达质粒,转染HEK293T细胞株验证重组质粒活性,并检测m GP73过表达情况下对小鼠肝癌细胞中mTOR m RNA水平的影响。方法:以实验室保存的H22小鼠肝癌细胞c DNA文库为模板,采用PCR技术扩增获得m GP73序列,将其插入pc DNA3.1-Flag-vector载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用蛋白免疫印迹检测融合蛋白的表达,并用q PCR检测在GP73过表达情况下H22细胞中mTOR转录水平的变化。结果:菌液PCR、重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,蛋白免疫印迹表明m GP73蛋白在HEK293T细胞中获得表达,q PCR结果表明在m GP73过表达时mTOR的转录水平随之上升。结论:构建了pc DNA3.1-Flag-m GP73真核表达质粒,m GP73 m RNA过表达时mTOR的m RNA水平也上升,这为进一步研究m GP73在小鼠肝脏肿瘤转移过程中的作用奠定了基础。
周鹏宇朱永杰曹叶陈健康魏从文何湘钟辉吴飞翔
关键词：重组质粒MTOR肿瘤转移
高尔基体蛋白73在肝细胞癌转移及侵袭中的作用被引量：7
2017年
目的探讨高尔基体蛋白73（GP73）在肝癌细胞增殖、转移和小鼠肿瘤形成中的作用。方法应用pX459－GP73－sgRNA重组质粒转染HepG2和H22肝癌细胞，通过筛选获得敲除GP73的细胞株。采用Western blot检测GP73在HepG2和H22细胞中的表达，采用平板克隆形成实验检测GP73对细胞生长能力的影响，采用流式细胞仪检测G2/M期细胞比例，采用Transwell实验检测GP73对细胞侵袭能力的影响，采用皮下种植实验检测GP73对H22细胞肿瘤形成能力的影响。结果经嘌呤霉素筛选获得稳定敲除GP73蛋白的H22和HepG2细胞。GP73敲除10 d后，HepG2细胞GP73－sgRNA转染组的细胞克隆数[（400±70）个]少于阴性对照组[（980±40）个]；H22细胞GP73－sgRNA转染组的细胞克隆数[（248±60）个]少于阴性对照组[（1 100±50）个]，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。敲除GP73蛋白后，细胞周期进程减慢。Transwell迁移实验中，HepG2细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为（312±50）个和（1 540±87）个；H22细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为（305±49）个和（1 270±86）个，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。侵袭实验中，HepG2细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为（230±47）个和（648±74）个；H22细胞GP73－sgRNA转染组和阴性对照组的穿膜细胞数分别为（238±54）个和（596±63）个，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。GP73敲除后，小鼠的肿瘤体积为（570±170）mm^3，小于对照组[（1 200±110）mm^3，P〈0.01]。结论敲除GP73蛋白能减弱H22和HepG2肝癌细胞的侵袭和迁移能力，GP73的表达可能与肿瘤侵袭、增殖和转移有关。
刘丽萍陈健康刘元明张丹浩张景杨晓莉
关键词：肝肿瘤小鼠高尔基体蛋白73肿瘤转移
RNF34调控天然免疫的初步研究
2017年
目的研究环指蛋白34(RING finger protein 34,RNF34)对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID和pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒,并在HEK293T细胞中瞬时表达;利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒(SeV)和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒;发现在SeV刺激下,RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用,RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性,RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。
朱永杰张萍萍周鹏宇王鹏皓陈健康田茵茵何湘钟辉
关键词：NF-ΚB干扰素Β
PTEN RNA干扰载体pSUPER的构建及功能鉴定
2016年
目的:构建抑制PTEN基因表达的pSUPER RNA干扰(RNAi)载体pSUPER PTEN并鉴定其功能。方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列,靶向细胞PTEN基因的寡核苷酸链,退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSU-PER质粒上,构建重组RNAi质粒pSUPER PTEN,通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果;将构建正确的质粒转染肝癌HepG2细胞,免疫印迹和qPCR检测HepG2中PTEN的表达及其对AKT信号通路的影响。结果:双酶切鉴定及测序结果分析表明碱基成功插入pSUPER PTEN载体指定位点,同时序列一致;免疫印迹结果证明pSUPER PTEN载体可抑制HepG2细胞中PTEN的表达,并且提高AKT的磷酸化水平。结论:靶向PTEN的pSUPER PTEN载体构建成功,该载体能够特异性抑制PTEN基因的表达。
陈健康何湘王莉刘元明杨晓莉
关键词：PTENPSUPERRNA干扰PI3K/AKT
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