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稳定表达PRRSV ORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌的构建及其生物学特性被引量：2: 2017年; 为构建能稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌,以p MD19-T-ORF5-7为模板,PCR分别扩增出ORF5和ORF6,将2个基因先后插入表达载体PYA3493,构建了重组质粒PYA3493-ORF5-ORF6。PCR、双酶切及测序结果表明,成功构建了重组质粒p YA3493-ORF5-ORF6。将该重组质粒电转至减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1基因缺失株,获得PRRSVORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6),并对该重组减毒猪霍乱沙门菌的生长特性、遗传稳定性和表达特性进行了测定。进一步对重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6)研究发现,其生长速度比强毒株C78-1明显减慢,与ΔcrpΔcyaΔasd C78-1缺失株及ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)互补菌株基本一致。在体外连续传代能够稳定遗传ORF5-ORF6融合基因。重组菌培养上清经SDS-PAGE能检测到ORF5-ORF6蛋白条带,且经Western-blot分析证实,重组菌共表达的GP5和M蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合。以上结果表明,能稳定携带ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6)构建成功,为开发猪繁殖与呼吸综合征和仔猪副伤寒基因工程二联疫苗奠定了良好基础。; 杨亚东张俊峰张春杰陈松彪程相朝廖成水刘莎莎王二鑫张晓洁尚珂汪洋; 关键词：PRRSV 生物学特性

鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株生物学特性的检测: 观察鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株生物学特性.cya(adenylate cyclase,cya)基因编码环化腺苷酸合成酶，细菌缺失cya时也就失去了生成cAMP的能力，因此在一定程度上影响细菌的各种生理活动...; 刘莎莎贾艳艳张春杰陈松彪廖成水杨亚东王二鑫程相朝; 关键词：兽医学鼠伤寒沙门菌生物学特性生理活动物质代谢

猪源肠道益生乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性的研究被引量：12: 2018年; 从健康仔猪体内分离到1株乳酸菌，利用微生物系统分析仪以及16SrRNA基因测序比对，确定该分离株为屎肠球菌（E．faecium），遂将其命名为LY001。并进一步对其抗逆性、耐药性、生物被膜形成、抑菌性能以及对小鼠的致病性等生物学特性进行研究。结果，该菌株在大约6h以后生长达到稳定期，具有较好的抗逆性;它对青霉素类、头孢菌素类以及喹诺酮类表现敏感，对氨基糖苷类、大环内酯类以及四环素类表现耐药;它具有一定的生物被膜形成能力；其培养上清能在一定程度上抑制大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌的生长;该菌对小鼠不具有致病性。以上结果表明，该分离株有潜力作为优良益生菌制剂的菌株。; 陈松彪陈慧敏陈慧敏廖成水丁轲程相朝廖成水吴庭才; 关键词：屎肠球菌抗逆性

减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsseK1Δasd宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究被引量：2: 2017年; 目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体。方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344Δsse K1为亲本株,运用二步法筛选asd基因缺失株SL1344Δsse K1Δasd。将携带有asd基因的无抗性p YA3493质粒电转至上述缺失菌株SL1344Δsse K1Δasd,构建SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)重组菌株。结果:PCR及测序结果表明SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)构建成功。进一步研究表明重组菌株SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)血清型和强毒株SL1344及亲本株SL1344Δsse K1相同,且能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344及亲本株SL1344Δsse K1相比均无明显差异。小鼠毒力试验表明,SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为5.24×108CFU,毒力较强毒株SL1344约下降至0.048%;免疫保护效力试验显示,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率,与亲本株SL1344Δsse K1基本一致。结论:以上结果表明,鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株宿主-载体平衡致死系统构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。; 杨亚东丁轲张春杰程相朝贾艳艳何雷; 关键词：鼠伤寒沙门菌

一株猪源益生屎肠球菌的分离鉴定及其生物学特性的研究: <正>研究目的肠球菌是一种革兰氏阳性菌,最早人们将其划分为链球菌属,直到1984年Schleifer等才将其从链球菌属分离出来,划分为肠球菌属,是继乳酸菌属和链球菌属的第三大类乳酸菌,其中最常见的是屎肠球菌和粪肠球菌。其...; 陈松彪廖成水张春杰程相朝杨亚东单玲玲; 关键词：生物学特性屎肠球菌; 文献传递

一株猪源益生屎肠球菌的分离鉴定及其生物学特性的研究: 陈松彪廖成水张春杰程相朝杨亚东单玲玲

鼠伤寒沙门菌SseK1基因原核表达载体的构建及其表达鉴定: 杨亚东张春杰程相朝陈松彪廖成水张俊峰颜云飞刘莎莎王二鑫

河南省猪腹泻性病毒流行病学调查及PEDV S、M基因遗传变异分析: <正>引言本研究对引起河南省猪病毒性腹泻病的主要病原的流行情况进行调查分析,并着重对猪流行性腹泻病毒(PEDV)新近流行株S、M基因的遗传变异情况进行分析,以了解河南省目前猪病毒性腹泻的流行现状及PEDV的遗传变异情况,...; 王二鑫张春杰廖成水何雷杨亚东李银聚吴庭才程相朝; 关键词：主要病原猪病毒性腹泻基因遗传; 文献传递

鼠伤寒沙门菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株的构建及其生物学特性的初步研究被引量：3: 2017年; 为研制更加安全有效且遗传背景清晰的鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)疫苗弱毒株,本研究首先构建了含缺失1 011 bp sseK1基因的重组自杀性质粒PREΔsseK1,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选SL1344的sseK1缺失株。PCR、双酶切及测序结果表明SL1344ΔsseK1构建成功。生物学特性初步研究表明,与亲本菌株SL1344相比,缺失株SL1344ΔsseK1保留了亲本株SL1344的血清型1,4,5,12∶i∶1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK1基因,生长速度及生化特性没有发生明显改变。小鼠毒力试验表明,SL1344ΔsseK1缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD_(50)为6.63×10~8CFU,毒力较亲本株SL1344下降至0.048%。免疫保护效力试验显示,小鼠免疫后第14天血清抗体Ig G含量达到最高,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率。以上研究结果表明,SL1344株sseK1基因缺失株构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为研究sseK1基因的致病机制及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础。; 杨亚东张春杰张春杰丁轲程相朝郁川丁轲陈松彪李银聚张晓洁; 关键词：生物学特性

稳定携带PRRSV ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌的构建及特性研究: 杨亚东张春杰程相朝张俊峰陈松彪廖成水颜云飞刘莎莎王二鑫

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杨亚东

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