陆杰
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中山大学公共卫生学院医学统计与流行病学系更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- H5N1禽流感病毒HA与NA基因克隆及分泌表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆和表达H5N1型流感病毒血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因,为制备抗体和亚单位疫苗打基础。方法采用PCR技术扩增H5N1型流感病毒H5A和N1A基因,克隆入含有醇氧化酶-1(AOX1)启动子和分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,构建重组载体;经电穿孔转化酵母宿主菌GS115,筛选高拷贝重组转化子,筛选后摇瓶培养,1%甲醇诱导表达;诱导培养上清经聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western-blot)检测蛋白表达情况。结果电泳和测序证实成功构建酵母表达载体pPIC9K-H5A和pPIC9K-N1A,重组蛋白在毕赤酵母中可以高效表达,表达蛋白分子量大小约为64和52 kD,第3和第4天表达量最高;Western-blot检测显示,目的蛋白能与H5亚型的AIV血清结合。结论成功克隆并表达H5N1型流感病毒HA、NA基因序列,为诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定基础。
- 吴蒙刘宇鸽李改瑞彭敬陆杰陆家海
- 关键词：流感病毒H5N1毕赤酵母分泌表达
