徐聪
- 作品数：7 被引量：1H指数：1
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- ZNF750抑制口腔鳞癌细胞恶性进展的研究
- 研究目的:鳞癌多有锌指蛋白750 （ZNF750）的缺失突变,且与鳞状上皮恶性生物学特性相关,有关ZNF750与口腔肿瘤的关系尚未见有研究,拟研究ZNF750抑制口腔肿瘤发生发展的作用。研究方法:免疫组化法揭示OSCC组...
- 陈海英杨红莉徐聪潘丽张颖新李克义张彬
- 关键词：口腔鳞癌增殖
- 文献传递
- 口腔肿瘤干细胞样细胞中锌指蛋白750的潜在靶蛋白筛选
- 2023年
- 目的筛选锌指蛋白750(ZNF750)在口腔肿瘤干细胞样细胞(CSC-like cell)中的潜在靶蛋白。方法(1)CSC-like cell的富集:采用肿瘤球形成实验富集口腔鳞癌(OSCC)细胞系TCA-83及CAL-27细胞中CSC-like cell细胞。(2)CSC-like cell细胞中ZNF750潜在靶蛋白筛选:将CSC-like cell分为oe-Con组(转导空载体慢病毒)及oeZNF750组(转导过表达ZNF750慢病毒),采用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选两组差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物信息学分析[GO、KEGG及IPR(结构域)分析],从差异表达蛋白中选择与ZNF750关系密切的候选蛋白[角鲨烯合酶(FDFT1)、与糖代谢相关的糖原合成酶(GYS1)、与核糖体相关的核糖体蛋白RPL15及40S核糖体蛋白RPS7以及具有结构分子活性的角蛋白6A、17(KRT6A、KRT17)]进行实时荧光定量PCR(qPCR)验证。从与ZNF750关系密切的候选蛋白中选择FDFT1(与类固醇生物合成有关兼具酶转运活性)作为兴趣蛋白,采用qPCR检测CSC-like cell、口腔鳞癌(OSCC)细胞、正常口腔上皮细胞中FDFT1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法检测过表达或敲减ZNF750基因的CSC-like cell中FDFT1蛋白相对表达量。结果(1)转导过表达ZNF750基因的CSC-like cell细胞中差异表达蛋白的筛选结果:与oe-Con组相比,oe-ZNF750组中差异表达蛋白共26个,其中上调9个,下调17个。(2)差异表达蛋白生信分析结果及其中与ZNF750关系密切的差异表达蛋白验证结果:GO分析结果显示,差异表达蛋白主要位于细胞内和细胞内非膜结合细胞器,参与生物合成及生物大分子的合成过程;涉及的生物功能包含结构分子活性、糖原合成酶活性、糖脂转运及糖脂结合功能;KEGG信号通路分析结果显示,差异表达蛋白显著富集在类固醇生物合成及糖代谢过程中;IPR分析证明富集的结构域包含糖脂转移蛋白结构域。qPCR结果显示,ZNF750可降低FDFT1、GYS1、RPL15、RPS7、KRT6A、KRT17基因的表达(P均<0.05)。(3)CSC-like
- 姜博于水杨一昆徐聪杨红莉陈海英
- 关键词：胆固醇代谢
- 一种无菌细胞外囊泡的提取方法
- 本申请涉及一种无菌细胞外囊泡的提取方法，属于细胞外颗粒提取技术领域。本申请提供的方法包括重悬细胞后在2～6℃条件下放置2～8h之后进行离心去除细胞、细胞碎片和lEV的步骤。本申请方法具有提取的EVs含量更高、产品完整度更...
- 陈海英杨红莉徐聪杨一昆
- rBMSCs/F92A-Cav1对PAH大鼠的治疗作用及其机制
- 2017年
- 目的探讨过表达F92A-丙氨酸替代窖蛋白-1(Cav1)的大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs/F92A-Cav1)对肺动脉高压(PAH)大鼠的治疗作用及其机制。方法予成年雄性Wistar大鼠腹腔注射1%野百合碱(MCT,60 mg/kg)建立PAH模型,建模后2周随机分为3组(10只/组):PAH组(仅给予MCT)、Cav1组(转导LV-Cav1的r BMSCs)、F92A-Cav1组(转导LV-F92A-Cav1的r BMSCs),同时设置正常组。基因修饰的r BMSCs(1×106/m L)于尾静脉移植入各组PAH大鼠,移植后3周,采用Image-Pro Plus 6 software评估肺动脉中膜厚度指数(MT%)、右心肥大指数(RVHI),采用Griess法检测血清NO水平,采用Western blotting法检测肺组织PI3K、AKT蛋白的相对表达量。结果PAH组MT%、RVHI及肺组织PI3K、AKT蛋白相对表达量均较正常组升高,但血清NO水平降低(P<0.05或<0.01);与PAH组相比,Cav1组、F92A-Cav1组中MT%、RVHI及肺组织PI3K、AKT蛋白相对表达量均降低,而血清NO水平增加,以F92A-Cav1组为著(P<0.05或<0.01)。结论 r BMSCs/F92A-Cav1可通过解除野生型Cav1对e NOS的抑制,促进NO释放,从而抑制PAH大鼠肺组织PI3K/AKT通路激活,进而发挥对PAH大鼠的治疗作用。
- 徐聪夏鹏杨红莉唐文强潘丽王兰花陈双峰张颖新王乐信陈海英
- 关键词：肺动脉高压窖蛋白-1骨髓间充质干细胞
- rBMSCs/Cav1^(F92A)对PAH大鼠肺血管增殖性病变的影响及其机制被引量：1
- 2017年
- 目的探讨突变型窑蛋白1(Cav1^(F92A))修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs/Cav1^(F92A))对肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管增殖性病变的影响及其可能的机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为窑蛋白1(Cav1)组、Cav1^(F92A)组、PAH组及正常对照组,每组10只。Cav1组、Cav1^(F92A)组、PAH组给予1%野百合碱60 mg/kg腹腔注射建立PAH模型,正常对照组腹腔注射等体积生理盐水。建模后2周,Cav1组、Cav1^(F92A)组分别于尾静脉移植r BMSCs/Cav1、r BMSCs/Cav1^(F92A)各1 m L(1×10~6个/m L),PAH组不予处理。各组移植后3周处死,分离肺组织。HE染色后显微镜下观察肺血管管腔及血管壁厚度改变,采用实时荧光定量PCR法检测肺组织Bbc3、B细胞易位2(Btg2)、Dab2、过氧化物酶体增生物激活受体(Ppard)、Rock1、富亮氨酸alpha-2糖蛋白1(Lrg1)基因表达,采用Western blotting法检测肺组织内皮素1(ET-1)、平滑肌肌球蛋白重链(Myocardin)蛋白表达。结果与正常对照组比较,PAH组肺血管管腔显著狭窄,几乎闭锁,血管壁明显增生肥厚。Cav1组、Cav1^(F92A)组较PAH组肺血管壁增厚程度减轻,以Cav1^(F92A)组减轻更明显,但肺血管壁仍较正常对照组增厚。与正常对照组比较,PAH组肺组织Bbc3、Btg2 mRNA相对表达量均降低,Dab2、Ppard、Rock1、Lrg1 mRNA相对表达量及ET-1、Myocardin蛋白相对表达量均升高(P均<0.01)。与PAH组比较,Cav1组与Cav1^(F92A)组肺组织Btg2 mRNA相对表达量均升高,Dab2、Ppard、Rock1及Lrg1mRNA相对表达量均降低,且Cav1^(F92A)组Ppard、Rock1及Lrg1 mRNA相对表达量降低更明显(P<0.05或<0.01)。Cav1^(F92A)组肺组织Bbc3、Btg2 mRNA相对表达量均高于PAH组、Cav1组(P<0.05或<0.01)。与PAH组、Cav1组比较,Cav1^(F92A)组肺组织ET-1、Myocardin蛋白相对表达量均降低(P均<0.01)。结论 r BMSCs/Cav1^(F92A)可减轻PAH大鼠的肺血管增殖性病变;通过上调Bbc3、Btg2基因表达,下调Ppard、Dab2、Rock1基因及ET-1、Myocardin蛋白表�
- 杨红莉潘丽徐聪唐文强汪磊夏鹏陈双峰王乐信陈海英
- 关键词：肺动脉高压内皮型一氧化氮合酶一氧化氮
- ZNF750抑制口腔鳞癌细胞恶性进展的研究
- 研究目的：鳞癌多有锌指蛋白750(ZNF750)的缺失突变，且与鳞状上皮恶性生物学特性相关，有关ZNF750 与口腔肿瘤的关系尚未见有研究，拟研究ZNF750 抑制口腔肿瘤发生发展的作用。
- 陈海英杨红莉徐聪潘丽张颖新李克义张彬
- 关键词：口腔鳞癌增殖
- 野生型ZNF750负调控E2F2转录活性抑制CAL-27细胞增殖迁移的机制
- 2022年
- 目的 研究锌指蛋白750(ZNF750)调控E2F转录因子2(E2F2)抑制口腔鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移的作用及机制。方法 采用BrdU染色研究ZNF750对CAL-27细胞周期的影响;蛋白质印迹法检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4、CDK6、活化Caspase-3及E2F2蛋白的表达;Calcein AM与EthD-1共染研究ZNF750对CAL-27失巢凋亡的影响;肿瘤悬浮成球及Transwell实验研究ZNF750对CAL-27细胞自我更新及侵袭迁移的影响;分析E2F2对CAL-27细胞生物学功能的影响。双荧光素酶报告基因分析ZNF750对系列E2F2启动子截短体的荧光素酶活性的影响;双荧光素酶报告基因实验、CCK-8及细胞划痕实验分别研究野生型及突变型ZNF750对E2F2荧光素酶活性、细胞活性及迁移的影响。结果 与oe-Con相比,过表达ZNF750可使细胞周期阻滞于G期[(50.07±5.74)%,P=0.010]、S期细胞减少[(32.15±2.47)%,P=0.003],抑制CDK4(0.19±0.01,P<0.001)、CDK6(0.27±0.00,P<0.001)表达;促进活化Caspase-3(0.92±0.02,P<0.001)蛋白表达,促进CAL-27细胞失巢凋亡,并抑制细胞的自我更新(8.67±1.15,P=0.009)、侵袭(80.60±2.52,P<0.001)及迁移(52.33±3.51,P<0.001)。然而,干扰ZNF750基因则引起相反的变化。ZNF750的潜在调控靶标E2F2则可促进CAL-27细胞肿瘤球形成,细胞侵袭、迁移增强,而降低细胞的失巢凋亡。荧光素酶报告基因结果显示,ZNF750可抑制E2F2的荧光素酶活性(0.375±0.031,P=0.007),尤其是Z+ET8(-154→+100)截短体组(0.057±0.007,P<0.001)的活性;在蛋白水平也证实,ZNF750可抑制E2F2蛋白表达(0.26±0.14,P=0.003)。此外,突变ZNF750模序(C2H2和PLNLS)则丧失了其对E2F2的调控及对CAL-27细胞活性、细胞迁移的抑制作用。结论 ZNF750主要通过C2H2和PLNLS模序负调控E2F2的表达抑制CAL-27细胞的增殖与迁移。
- 徐聪杨红莉杨一昆潘丽陈海英
- 关键词：口腔鳞状细胞癌细胞迁移
