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Survivin多表位真核表达载体的构建及其在树突状细胞中的表达被引量：3: 2011年; 目的:构建人生存素(survivin)的多表位真核表达载体,并在人树突状细胞(DC)中进行表达。方法:人工合成含4个survivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL表位和一个CD4+Th表位的重组cDNA片段,克隆到pBluescript II SK(+)载体上,测序正确后将目的基因连接到真核表达载体pIRESneo3.0中,构建的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th。将其转染人DC并筛选,进行稳定表达。结果:构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并成功地转染了人DC。结论:成功地构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并在人DC中稳定表达,为进一步研究多表位肿瘤疫苗奠定基础。; 王效远宋文哲李向农郭萌梁骁李莹; 关键词：SURVIVIN 多表位树突状细胞肿瘤疫苗

荷载人生存素的多表位树突状细胞疫苗的抗肿瘤活性研究被引量：2: 2011年; 目的:观察荷载人生存素(survivin)的多表位树突状细胞(DC)疫苗的抗肿瘤活性。方法:分别将含4个sur-vivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL表位和1个CD4+Th细胞表位的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th,以及含4个CD8+CTL表位的重组质粒pPIRESneo3.0-survivin(4),转染人DC并制备DC疫苗。实验分为survivin(4)/Th组、survivin(4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组。DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率明显高于survivin(4)组(P<0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P<0.05)。运用流式细胞术(FCM)分别检测DC表面CD83、CD86、T淋巴细胞表面CD4、CD8a的表达以及DC疫苗作用后MCF-7乳腺癌细胞的凋亡。用ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测DC疫苗诱导的CTL对MCF-7细胞的抑制率。结果:流式细胞术检测显示,人DC高表达CD83、CD86;人外周血T淋巴细胞高表达CD4、CD8a;survivin(4)/Th组IFN-γ的含量[(66.50±3.34)ng/L]明显高于survivin(4)组[(46.10±1.35)ng/L]、空质粒组[(25.17±0.32)ng/L]、未转染DC与T细胞共培养组[(25.47±0.95)ng/L]和单独T淋巴细胞组[(23.73±0.50)ng/L],P<0.05。survivin(4)/Th组中MCF-7细胞的抑制率明显高于survivin(4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P<0.05)。DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率[(10.63±0.29)%]明显高于survivin(4)组(P<0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P<0.05)。结论:荷载多个survivin的CD8+CTL表位的树突状细胞肿瘤疫苗具有很强的抗肿瘤活性,CD4+Th细胞对CD8+CTL的抗肿瘤方面有明显的促进作用。; 郭萌王效远宋文哲李向农梁骁李莹黄智龙; 关键词：生存素表位树突状细胞肿瘤疫苗

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王效远

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