张亮
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金现代苹果产业技术体系建设专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 双峰驼IgM部分重链的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2020年
- 为获取双峰驼免疫球蛋白M(IgM)重链恒定区的表达产物及抗体,首先在GenBank找出收录的双峰驼IgM、IgA、IgE、IgG重链恒定区基因序列,比对IgM与IgA、IgE和IgG的氨基酸序列,选取一段差异较大的蛋白序列片段,转换成相对应的基因片段,PCR扩增选取的基因片段,插入pET-28a(+)载体构建重组载体,转化进大肠埃希菌BL21,并诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE鉴定重组蛋白,后利用纯化的蛋白免疫家兔,制备抗血清,ELISA和Western blot鉴定获得的血清。结果显示,成功构建了载体pET-28a-IgM,诱导表达的目的蛋白分子质量为18.7 ku,与预期相符。ELISA方法检测抗血清效价为1∶32000,Western blot结果显示该血清能特异性识别原核表达蛋白,说明双峰驼IgM兔抗血清的成功制备。
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- 关键词：双峰驼免疫球蛋白M原核表达抗体制备
- 双峰驼IgA基因的原核表达及抗体制备被引量：5
- 2019年
- 为制备抗双峰驼IgA的抗体,将双峰驼IgA重链恒定区基因克隆至pET-28a(+)上,构建重组蛋白质粒pET-28a-IgA-H,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化,以及SDS-PAGE和Western blot验证。用以获得的目的蛋白制备兔抗双峰驼IgA多克隆抗体,并通过ELISA和Western blot检测效价及其特异性。结果表明,获得的重组目的蛋白大小约为39 ku,最佳诱导表达条件为IPTG 23.83μg/mL、诱导时间6 h,且重组蛋白主要以包涵体的形式表达。ELISA检测显示抗体效价达1∶32000,Western blot鉴定抗体能特异性识别原核表达的pET-28a-IgA-H蛋白,并能有效地将双峰驼IgA与IgG区别开来,表明成功获得了双峰驼IgA重链恒定区的重组蛋白及特异性良好的多克隆抗体。
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- 关键词：双峰驼IGA原核表达抗体制备
- 2017-2018年山东省奶牛场犊牛腹泻相关病毒病原学检测被引量：18
- 2020年
- 为了解山东省奶牛养殖场中引起犊牛腹泻相关病毒的流行情况,2017-2018年,在全省13个地区51家规模化奶牛养殖场,采集624份犊牛腹泻病料样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛冠状病毒(BCo V)和牛轮状病毒(BRV)PCR检测,并对检测结果采用SPSS 20.0软件进行数据统计以及显著性差异分析(Pearson卡方检验)。结果显示:BVDV、BEV、BCo V、BRV个体检出率分别为34.58%、11.78%、8.84%、17.70%,群体检出率分别为47.83%、38.89%、35.71%、33.33%,BVDV检出率显著高于其他3种病毒(P<0.01),且有流行加重趋势;鲁西北、鲁中、鲁西南、半岛地区4种病毒的检出率有差异,其中鲁中地区的BVDV检出率明显高于其他地区(P<0.01)。结果表明,BVDV、BEV、BCo V、BRV 4种病原在山东省奶牛场中流行广泛,以BVDV流行最为严重,尤其是鲁中地区,且有流行加重趋势,成为导致奶牛场犊牛腹泻的主要病毒性因素,建议有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了山东省不同地区引起奶牛犊牛腹泻相关病毒的感染情况,可为山东省制定奶牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。
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- 关键词：犊牛腹泻病原学检测牛病毒性腹泻病毒牛冠状病毒牛轮状病毒
- 浓缩苹果汁中3种污染菌多重PCR检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 根据大肠杆菌的β葡糖醛酸酶基因(uid)、沙门氏菌侵袭性抗原保守基因(invA)和金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc),分别设计3对特异性引物,通过对单管多重PCR扩增的特异性、敏感性以及扩增条件进行优化.结果表明:3对引物分别能扩增出147bp、570bp和280bp的特异性条带,反应条件优化后,3种目的菌在104 CFU/mL时均可同时扩增出较清晰条带(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在103 CFU/ml浓度下仍然可见到条带),仅沙门氏菌的检测比单基因PCR低一个稀释度,人工模拟果汁污染试验结果稳定.该方法操作简单、快速、特异性强,灵敏度高,能够实现对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌3种菌的快速诊断检测和生产过程监控.
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- 关键词：浓缩苹果汁沙门氏菌金黄色葡萄球菌多重PCR
- 双峰驼IgA基因的原核表达及抗体制备
- 研究目的:黏膜免疫在维持机体局部免疫稳态中发挥关键作用,其中免疫球蛋白A(Immunoglobulin A, IgA)是黏膜免疫应答的主效应分子。制备高效特异的抗双峰驼IgA抗体,可为深入探讨双峰驼IgA在机体中的相关免...
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- 关键词：双峰驼原核表达抗体制备IGA
- 文献传递
- 双峰驼IgM重链的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 为获取双峰驼免疫球蛋白M(IgM)重链恒定区的表达产物及抗体,首先找出Gen Bank收录的双峰驼IgM、IgA、IgE、IgG重链恒定区基因序列,比对IgM与IgA、IgE和IgG的氨基酸序列,选取一段差异较大的蛋白序...
- 李敏吴秀萍张旺东张亮何晚红李建飞李瑞火兴民刘丽萍王雯慧
- 关键词：双峰驼免疫球蛋白M原核表达抗体制备
- 文献传递
