陈学辉
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金上海市科委技术标准专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 体外转录生成短双链干扰RNA的方法
- 一种体外转录生成短双链干扰RNA方法，用于生物、基因工程技术领域。首先设计合成T7启动子18bp及含目标基因20bp和T7启动子反向互补序列18bpDNA寡核苷酸链，两者退火后形成双链DNA，合成T7启动子18bp及含目...
- 潘玉春孟和陈学辉崔芳岩王启山
- 文献传递
- 基于单核细胞生物学特性的高抗病力检测试剂盒研制
- 李宁连正兴刘琳李海宁中华邓学梅孙书锋刘云波李俊英潘求真蒋桂芳张庆才张宇张宝路陈学辉杨泽霖
- 简要技术说明：（1）开发了外周血单核细胞快速分离的新型淋巴细胞分离液，且具如下优点：减少了样品和分离液混合的弊端，保证了样品的有效性；缩短加样时间，并可进行多个样品的同时分离；技术更新后采血量明显下降。（2）实现了单核／...
- 关键词：
- 关键词：单核细胞检测试剂盒
- 鸡传染性支气管炎病毒澳大利亚T株部分基因序列的克隆与分析被引量：6
- 2005年
- 澳大利亚T株(IBVT-)是鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)主要代表毒株之一。目前,在相关生物数据库中IBV-基因序列极少。实验通过对GenBank中已有IBV基因序列比较,在IBV编码蛋白S、N、M和RdRp基因的高度同源区设计了四对引物,并通过反转录聚合酶链式反应R(TP-CR)获得特异性扩增产物。克隆测序结果证明扩增产物确为IBV相应基因片段。所获序列同IBV其它类型相关基因序列比较结果显示,编码蛋白S、N、M和RdRp基因的同源性分别为80.51%～87.22%%,85.83%～91.25%,89.63%～91.01%和85.97%～92.37%。实验丰富了生物数据库中IBVT-基因序列。所设计的引物表现很好的扩增效率和特异性,对于IBV其它毒株的检测和鉴定有一定的借鉴作用。
- 崔芳岩孟和陈学辉潘玉春
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测
- 短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响被引量：12
- 2004年
- RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA (siGAPDH )分别同绿荧光蛋白(Greenfluorescentprotein ,GFP)表达载体 (pEGFP C1Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM2 0 0 0共转染鸡胚盘细胞 ,并于转染后 36h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果。对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示 ,不同处理组间差异达极显著水准 ,其中GFP组和GFP +siGAPDH组均同GFP +siGFP组差异极显著 ,GFP组同GFP +siGAPDH组差异不显著。实验结果说明 ,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达。同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样 ,鸡胚盘细胞中也存在短双链干扰RNA (siRNA)
- 孟和陈学辉王起山崔芳岩潘玉春
- 关键词：RNA干扰RNAI
- RNA干扰用siRNA的体外转录合成被引量：4
- 2004年
- RNA干扰(RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具,而获得符合干扰要求的短双链干扰RNA(smallinterferenceRNA,siRNA)是进行RNA;研究的首要步骤。本研究建立了体外转录合成siRNA方法,并用其生成的siRNA干扰鸡成纤维细胞外源绿荧光蛋白(GFP)基因和内源3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达。结果显示,siRNA能特异性降低鸡成纤维细胞中内外源基因的表达。本实验认为这种以DNA为模板体外转录合成siRNA方法操作简单、成本低、产物得率高,值得从事RNA研究者参考借鉴。
- 孟和陈学辉潘玉春
- 关键词：RNA干扰RNAISIRNAGFPGAPDH
- siRNA对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)复制的影响被引量：3
- 2008年
- RNA干涉(RNAi)可以通过短双链RNA(siRNA)介导,特异地降解相应的mRNA,从而抑制基因表达,导致转录后水平的基因沉默(PTGS)。本研究利用这种技术,将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染体外培养的Vero-E6,使其适应Vero-E6,然后用体外转录合成的针对IBV部分基因的siRNA,对其复制进行RNAi。结果显示,针对IBVM蛋白的siRNA能有效地抑制IBV在Vero-E6细胞中的复制。
- 陈学辉孟和崔芳岩连正兴潘玉春
- 关键词：RNA干涉鸡传染性支气管炎病毒
- siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用被引量：4
- 2005年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。
- 陈学辉孟和潘玉春崔芳岩
- 关键词：RNAI
- 优良的BMPR-IB基因型可提高绵羊冷冻胚胎的受胎效果被引量：4
- 2006年
- 以控制BooroolaMerino羊高繁殖力的BMPR-IB基因为候选基因,以小尾寒羊及其杂交羊、东北半细毛羊、澳洲美利奴羊、德国肉用美利奴羊、萨福克羊、特克塞尔羊、夏洛莱羊为试验对象,采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行基因单核苷酸多态性(SNP)检测和基因型分析,同时研究基因对高繁殖力的影响.研究结果表明:小尾寒羊及其杂交羊、东北半细毛羊和夏洛莱羊群体中发现了与BooroolaMerino羊相同的A746G碱基突变,而小尾寒羊及其杂交羊群体的B等位基因频率明显高于其他2个品种.另外4个品种中未发现此突变.携带B等位基因的群体较非携带B等位基因群体排出更多的卵子,排卵后黄体直径较小.移植入冷冻胚胎后,++、B+和BB3种基因型群体的妊娠率分别为38.78%、45.71%和66.67%.由此推断,BMPR-IB基因突变很有可能从增加卵巢排卵数和提高胚胎着床及妊娠建立效率两个方面同时影响绵羊高繁殖力性状.所得BB型群体冻胚移植妊娠率明显高于++和B+型群体,已接近鲜胚移植水平,通过PCR-RFLP方法进行基因型分析,选用合适基因型群体作为胚胎移植受体,有可能为提高绵羊胚胎移植受胎率提供新的方向.
- 姚玉昌田亮韩红兵陈学辉陆明海郭鹏程张超峰李宁连正兴李武
- 关键词：绵羊高繁殖力BMPR-IB基因冷冻胚胎受胎率
- 非洲绿猴肾细胞外源绿色荧光蛋白基因表达的RNA干扰被引量：4
- 2004年
- 非洲绿猴肾细胞 (Vero)是多种病毒的适应细胞。本研究将外源的绿色荧光蛋白 (GFP)基因转染到Vero-E6中 ,并利用体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA(siGFP)对其表达进行干扰。结果显示 :siGFP能有效阻断外源的绿色荧光蛋白基因在Vero -E6细胞中的表达 ,而不相关的siRNA则对绿荧光蛋白基因的表达没有影响。这为利用RNAi技术在Vero -E6细胞中 ,抑制外源基因的表达以及通过RNAi技术进行抗病毒的研究奠定了一定的基础。
- 陈学辉崔芳岩孟和潘玉春
- 关键词：肾细胞基因表达RNA干扰抗病毒转录后基因沉默
