李阳
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：电子科技大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化被引量：2
- 2010年
- 卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等一类高价值手性药物中间体。卤醇脱卤酶的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用。通过PCR扩增,将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至pBAD表达载体中,经测序鉴定后,将其转入大肠杆菌TOP10中,对其重组表达条件进行优化,以提高蛋白表达量。同时,对该酶在已构建好的T7表达体系中的表达条件也进行了优化。经酶活测定及SDS-PAGE分析,选择最优条件进行500ml摇瓶的表达,在两种表达体系中,可溶性目的蛋白的含量均大大提高,占总蛋白含量35%左右。采用Q-Sepharose阴离子交换层析技术一步纯化,分别获得纯度为90%的卤醇脱卤酶34mg和41mg。同时,pBADHheC表达体系的构建为卤醇脱卤酶的生物催化特性改造奠定了基础。
- 李阳汤丽霞郑楷王雄江荣香
- 关键词：纯化
- 二硫键的氧化还原状态对Trx融合赤霉酸诱导富含半胱氨酸蛋白内源荧光及变性过程影响被引量：2
- 2010年
- 在采用亲和层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对原核表达的赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白(Trx-GcGASA)进行纯化、鉴定的基础上,运用稳态荧光光谱手段研究了二硫苏糖醇(DTT)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、过氧化氢、盐酸胍(GdnHCl)对Trx-GcGASA内源荧光及变性过程的影响,发现(1)在中性缓冲体系中融合蛋白的内源荧光以305 nm的酪氨酸的荧光发射为主;(2)伴随着二硫键还原,融合蛋白中色氨酸和酪氨酸的相对荧光强度比值从0.7变化至1.8倍左右;(3)经过0.5 mmol.L-1GSSG、5 mmol.L-1过氧化氢处理后,酪氨酸和色氨酸的荧光强度下降约12~21%;(4)无论是否采用1 mmol.L-1DTT处理,6 mol.L-1盐酸胍均不能诱导融合蛋白彻底变性;(5)二硫键的存在与否影响了盐酸胍诱导的变性过程。通过两态模型拟合获得Trx-GcGASA变性过程Gibbs自由能变化ΔG约为3.7 kJ.mol-1。相关工作不仅为深入研究融合伴侣Trx对GcGASA变性热力学、动力学及复性过程影响奠定了基础;同时,也为通过光谱手段获取GcGASA的结构信息提供了基础的数据。
- 张腾冯娟李阳陈锐汤丽霞庞小峰任正隆
- 关键词：内源荧光二硫键
