李靓云
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南京医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- PP2R1A逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响
- 2011年
- 目的:构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞,观察其定位,验证表达,研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法:逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcl10A1瞬时共转染293T细胞,收集病毒感染HEKTER细胞,在荧光显微镜下观察定位,标记荧光单克隆。挑取不同表达强度单克隆做western验证PP2R1A蛋白表达。运用流式细胞分析、体外创伤试验及生长曲线试验研究单克隆细胞的增殖及周期。结果:获得了过表达PP2R1A的单克隆细胞株,PP2R1A在细胞内广泛表达,结合western及细胞试验证实PP2R1A高表达阻滞细胞周期并减慢细胞生长。结论:PP2R1A是丝苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的结构A亚基的a亚型,在细胞内广泛表达。本文成功构建了表达PP2R1A的细胞株,研究发现PP2R1A高表达会影响细胞生长及细胞周期,减缓了细胞增殖。为进一步深入研究PP2R1A对PP2A全酶活性及功能、细胞转化的影响奠定了重要的实验基础。
- 付鹤玲李靓云李蕾李建民
- 关键词：单克隆亚细胞定位细胞周期
- RPAP3蛋白中TPR结构域的功能研究
- 2012年
- 目的:构建针对RPAP3 TPR区域的慢病毒载体,观察过表达对细胞周期的影响。方法:通过生物信息学软件比较RPAP3结构域组成,推测功能;分析RPAP3核定位信号,构建瞬时表达质粒pEGFP-N2-RPAP3,激光共聚焦显微镜观察RPAP3蛋白的亚细胞定位;通过酵母双杂交和GST-Pulldown实验研究RPAP3与HSP70的相互作用及作用靶点;构建慢病毒载体pLJM.1-RPAP3,转染293T细胞,收病毒感染MCF7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞系,流式细胞分析对细胞周期的影响。结果:RPAP3在多物种广泛存在,有高度保守性;蛋白存在典型核定位信号,激光共聚焦显微镜下,GFP标记的RPAP3蛋白主要分布在细胞核;酵母双杂交和GST-Pulldown实验证实RPAP3与HSP70间存在相互作用,且作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和HSP70的GPTIEEVD末端之间;流式细胞显示RPAP3 TPR区域的高表达阻滞细胞周期且凋亡增加。结论:RPAP3与HSP70间的相互作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和热休克蛋白70的GPTIEEVD末端之间;构建高表达细胞株发现其对细胞周期及凋亡有影响。
- 李靓云唐超陈霞李建民
- 关键词：亚细胞定位蛋白相互作用细胞周期
- NYD-SP15转基因小鼠的构建和表型分析及RPAP3和TTC21A蛋白中TPR结构域功能的研究
- 背景&目的：脱氨酶基因是一个古老而又崭新的酶类超家族，已发现该家族很多新成员，不同的是RNA和DNA中胞苷脱氨作用的改变。该家族许多成员与病毒感染、肿瘤发生、肿瘤耐药和机体免疫相关。NYD-SP15是我们新发现的具有胞苷...
- 李靓云
- 关键词：胞苷脱氨酶蛋白相互作用稳定细胞系
- 文献传递
