吴安娜
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南大学资源加工与生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌APS还原酶的表达、纯化及其性质鉴定被引量：3
- 2009年
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)中APS还原酶是硫同化途径的一个关键酶,其对硫酸盐的还原及硫化物的氧化具有重要调节作用。本文以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板,通过PCR扩增得到编码APS还原酶的cysH基因,与原核表达载体pLM1构建重组体,转化入大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α中,测序正确后,加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的APS还原酶。由蛋白颜色和紫外分析,确定其含有一个[Fe4S4]簇作为活性中心。表达产物进行SDS-PAGE分析,证实分子量为28kD。酶活测定表明其具有将APS还原为亚硫酸盐跟AMP的功能。
- 郑春丽张燕飞吴安娜戴云杰张晓键柳建设
- 关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌克隆纯化
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌中半胱氨酸脱硫酶IscS的表达、纯化及酶学性质研究
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌/(Acidithiobacillus ferrooxidans,A.ferrooxidans/)是存在于生物浸出和酸性矿区场地中研究最多的一种微生物。与铁和硫氧化相关的能量代谢研究引起了国内外学者的广...
- 吴安娜
- 关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌ISCS定点突变
- 文献传递
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氰酸酶的表达、纯化及其性质鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶,其作用主要包括氰化物的解毒,铁-硫蛋白的合成,以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成,硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用。方法:以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板设计引物,通过PCR扩增得到编码硫氰酸酶的基因,目的基因片段与原核表达载体PLM1构建重组体,然后转入大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5a感受态中,基因测序正确后,重组质粒再转入E.coliBL21感受态中,加IPTG诱导蛋白表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的硫氰酸酶。结果:SDS-PAGE分析证实蛋白分子量为21kD,紫外可见光分析,确定硫氰酸酶中含有铁硫簇,酶活测定发现重组硫氰酸酶在体外不具有酶活性,可能与酶反应条件及信号肽的切断有关。结论:体外成功克隆,表达,纯化出重组体硫氰酸酶,其基本性质也得到阐述。
- 戴云杰郑春丽谭建锡金德才吴安娜柳建设
- 关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁硫簇纯化
