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三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统的建立及评价被引量：5: 2018年; 目的建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统，并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用。方法分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒，利用双抗夹心法和病毒半数组织培养感染剂量法检测HPV假病毒浓度和感染滴度；利用单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒，检测HPV九价疫苗免疫小鼠血清的中和滴度，以验证三色混合荧光HPV假病毒系统的准确性；采用单色荧光和三色混合荧光HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒系统检测HPV九价疫苗免疫食蟹猴血清的中和滴度，判断其是否可应用于HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测。结果含有绿色、红色和蓝色荧光质粒的HPV16型假病毒的浓度为5~6 μg/ml，HPV6/11/18/31/33/45/52/58的三色混合荧光假病毒浓度为1~3 μg/ml。获得了分别含有EGFP、Mcherry和mTagBFP报告基因的9个型别的HPV假病毒，且满足中和检测需要；9个型别单色荧光HPV假病毒的滴度值均在1×104~1×105之间，即它们具有相似的感染滴度。检测HPV九价疫苗免疫的小鼠血清时，单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒系统所得中和滴度值差异均无统计学意义（P值均〉0.05）；检测HPV九价疫苗免疫的食蟹猴血清时，单色荧光与三色混合荧光A、B和C组HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒所得中和滴度值差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论成功地建立了三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统；验证其与单色荧光HPV假病毒系统具有一致性；证实其可应用于检测HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测中。; 魏双萍范飞陈洁柳欣林杨与柔王致萍宋硕李智海魏旻希王大宁李少伟夏宁邵; 关键词：疫苗免疫血清人乳头瘤病毒

悬浮驯化HEK-293FT细胞表达人乳头瘤病毒16型假病毒及其冷冻电镜结构解析被引量：4: 2016年; 为了大量获得人乳头瘤病毒（HPV）16型的假病毒颗粒（PsV）,将贴壁生长的293FT细胞驯化成为悬浮细胞系进行大规模的悬浮培养,同时优化假病毒纯化方法,并使用冷冻电镜解析其三维空间结构。本研究通过逐步降低培养基中血清浓度和加入抗聚团剂等方法,获得了可在Wave生物反应器中大规模悬浮培养的293FT细胞,经过携有HPV16L1、L2基因和GFP报告基因的质粒转染,实现了大规模制备HPV16假病毒;利用CsCl等密度和蔗糖密度梯度超速离心的方法,获得高纯度的HPV16假病毒颗粒,滴度为8.2×10^5 TCID50/μL;蛋白印迹结果显示HPV16假病毒中含有L1和L2蛋白,定量ELISA测得L1蛋白的含量为156.0μg/mL;最后使用Tecnai G2F30冷冻电镜和Falcon电子直接探测相机采集冷冻HPV16假病毒的图像,应用AUTO3DEM软件解析其结构,结构分辨率为14A,呈现为T=7的等二十面体对称结构,直径为600A。本研究为HPV疫苗临床血清中和检测、高分辨率HPV16假病毒的结构解析及L1和L2相互作用研究奠定了良好基础。; 王大宁刘亚静郑清炳李智海范飞柳欣林宋硕顾颖夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒假病毒

人乳头瘤病毒衣壳蛋白结构生物学研究进展被引量：4: 2016年; 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染会导致人类多种疾病,尤其是女性宫颈癌。HPV衣壳是由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2形成的T=7的正二十面体结构,L1蛋白具有较强的免疫原性且能在体外自组装形成与天然病毒结构相似的类病毒颗粒(virus like particle,VLP),是目前HPV疫苗的理想形式。此外,L1、L2蛋白在病毒的感染中发挥着重要作用。对HPV衣壳蛋白结构和功能的研究,有助于进一步阐明HPV的颗粒组装机制、致病机理及感染机制,为今后开展HPV相关疾病的研究提供指导方向。本文就HPV衣壳蛋白的结构、病毒颗粒组装及衣壳蛋白间相互作用研究进展进行综述。; 范飞柳欣林李智海王大宁夏宁邵李少伟; 关键词：人乳头瘤病毒衣壳蛋白结构生物学

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范飞

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