- 高糖环境下成纤维细胞分泌CXCL11对人脐静脉内皮细胞迁移的影响及其机制
- 2025年
- 目的研究高糖环境下成纤维细胞分泌CXC趋化因子配体11(CXCL11)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移的作用及其机制。方法取华中科技大学同济医学院附属梨园医院创面修复科2021年8月收治的1例糖尿病足溃疡(DFU)患者和该院手外科2021年9月收治的1例急性足外伤患者创缘皮肤组织,行单细胞转录组测序,分析成纤维细胞亚群中趋化因子配体与血管内皮细胞亚群中趋化因子受体的相互作用。纳入2022年1月至2024年12月武汉市第三医院内分泌科DFU患者和该院烧伤科急性足外伤患者各3例,取其石蜡包埋组织样本,采用免疫组化染色观察创缘皮肤组织中CXCL11及CXC趋化因子受体7(CXCR7)的表达。取正常人包皮成纤维细胞(HFF-1)和经D-葡萄糖处理后的高糖HFF-1细胞,分别为正常组和高糖组,收集2组培养48 h后的上清液作为正常条件培养基(NFs-CM)和高糖条件培养基(GFs-CM)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常组和高糖组细胞中CXCL11 mRNA表达水平。取HUVECs分为完全培养基组(CPM组)、NFs-CM组和GFs-CM组,行划痕实验计算划痕后12、24、36 h细胞迁移率。采用蛋白质印迹法检测CPM组、NFs-CM组和GFs-CM组HUVECs处理36 h后的CXCR7蛋白表达水平。利用CXCL11中和抗体处理HUVECs,实验分为6组:CPM组、CPM+anti-CXCL11组、NFs-CM组、NFs-CM+anti-CXCL11组、GFs-CM组和GFs-CM+anti-CXCL11组,重复划痕实验。所有实验分别重复3次。对数据行单因素方差分析(ANOVA)、Tukey's检验和t检验。结果与急性足外伤患者足背创缘皮肤组织比较,DFU患者创缘皮肤组织成纤维细胞亚群中趋化因子配体CXCL11与血管内皮细胞亚群中趋化因子受体CXCR7的相互作用明显增强,CXCL11及CXCR7蛋白表达水平显著升高(t=25.870、18.150,P<0.001)。与正常组比较,高糖组HFF-1细胞中CXCL11 mRNA表达水平显著升高(t=8.412,P=0.001)。划痕后36 h,GFs-CM组HUVECs细胞迁移率显著低于CPM组和NFs-CM组(P
- 王小双王小双阮琼芳韩彦曹萍曹萍李炳辉
- 关键词：成纤维细胞人脐静脉内皮细胞细胞迁移创面修复
- miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中HGF、GLUT4表达及GLUT4分布的影响被引量：2
- 2023年
- 目的探讨miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达及GLUT4分布的影响。方法将细胞分为对照组、模型组、miR-93-5p inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-93-5p mimics组和mimics-NC组。对照组细胞正常培养,模型组构建胰岛素抵抗细胞模型,其余组分别转染miR-93-5p inhibitor、inhibitor-NC、miR-93-5p mimics、mimics-NC,转染完成后构建胰岛素抵抗模型。CCK-8检测细胞存活率;试剂盒检测细胞上清液中葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量;qPCR检测miR-93-5p、HGF、GLUT4的mRNA表达水平;Western blot检测HGF、GLUT4蛋白表达水平;免疫荧光检测GLUT4的表达和分布。结果与对照组相比,模型组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01),miR-93-5p水平显著升高(P<0.01),GLUT4膜分布减少。与模型组相比,miR-93-5p inhibitor组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),miR-93-5p水平显著降低(P<0.01),GLUT4膜分布增多;mimics组结果相反。结论miR-93-5p能够抑制胰岛素抵抗细胞模型中HGF和GLUT4的表达,并减少GLUT4的膜分布,具有促进胰岛素抵抗的功能。
- 周曼吴军干定云陈婉曹萍李广利侯以琳
- 关键词：胰岛素抵抗肝细胞生长因子葡萄糖转运蛋白4
- 多粘菌素B、维拉帕米及二者联用预防血管成形术后管腔狭窄的实验研究
- 任江华王瑞英周晓阳曹茂银宋长杰曹萍巢升平曹竹龄陈德良雷红周毅
- 该成果基于蛋白激酶C和Ca^(2＋)是引起血管平滑肌细胞增殖的两个关键信使，以家兔为模型，通过单用及联用蛋白激酶C特异抑制剂PolymyxinB和^(2＋)阻滞剂Verapamit达到抑制血管平滑肌细胞过度增殖，预防血管...
- 关键词：
- 关键词：血管形成术多粘菌素B维拉帕米
- miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬
- 2024年
- 目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。
- 周曼曹萍侯以琳干定云李广利陈婉吴军
- 关键词：2型糖尿病胰岛素抵抗细胞自噬
