王晶
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
- 供职机构：同济医科大学更多>>
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- 在翻译水平上提高人干扰素α1基因的原核表达被引量：7
- 2002年
- 目的 根据翻译起始调控的定量理论及利用翻译增强子序列 ,提高人干扰素α1型变种IFN α1C基因的原核表达。方法 采用“步移式”聚合酶链反应 (PCR) ,对IFN α1C基因 5′端核苷酸序列进行三种不同程度的碱基突变 ,使IFN α1C在pBV2 2 0载体中形成的翻译起始区域 (TIR)的二级结构自由能 (△G)逐渐降低 ,同时 ,采用PCR技术 ,将翻译增强子cDNA序列引入pBV2 2 0中的SD序列上游 ,构建一种新型载体pBVE。结果 三种IFN α1C改造基因的表达量均有所提高 ,而且随△G从原有的 - 5 0 2 4 1.6J mol降至 - 2 2 190 .0J mol(绝对值 ,下同 ) ,其表达量有逐渐升高趋势 ,最高可达 2 .4 3×10 8U L ,约为IFN α1C母体的 13倍。选用IFN α1C及其三种改造基因为报导基因 ,结果显示以pBVE为载体的抗病毒活性比在pBV2 2 0中增强了 2～ 5倍。结论 含有翻译增强子的pBVE为一种新型原核高效表达载体。翻译调控的定量关系理论 ,可有效地运用于提高IFN α1C基因在大肠埃希菌中的表达。
- 王晶朱千政陈望秋陈秀珠侯云德
- 关键词：原核表达干扰素Α基因表达信使RNA聚合酶链反应
