彭晓东
- 作品数：3 被引量：29H指数：2
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- 抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达被引量：2
- 2004年
- 目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(singlechainFv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达。方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1ScFv基因pET28(a+)表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物。结果3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345bp,VL基因为309bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28000,并具有与抗原结合活性。结论成功构建了抗HnRNPA2/B1ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础。
- 王霞彭晓东黎光胡丽娟毕建虹
- 关键词：HNRNPA2/B1单克隆抗体可变区基因克隆特异性
- 猕猴输精管内注入HFMC节育后排出精子的超微结构观察
- 1992年
- 本实验取已注射HFMC猕猴精液,经胰蛋白酶处理液化后,用3.8％戊二醛预固定,1％锇酸后固定,逐级乙醇脱水,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸铀和枸椽酸铅染色,H-300透射电镜观察。结果显示注射AFMC后引起精子细胞膜和顶体膜断裂,顶体下间隙扩张;线粒体肿胀,部份呈空泡状。另观察一例猕猴附睾精子也发现类似改变。
- 何亚平罗自强李光蓉彭晓东
- 关键词：精子细胞HFMC超微结构观察线粒体肿胀超薄切片乙醇脱水
- 核酶抑制端粒酶活性的实验研究被引量：27
- 1999年
- 目的为有效切割肿瘤细胞端粒酶ＲＮＡ组分使端粒酶活性降低，从而使细胞不能维持端粒长度而在有限分裂后进入凋亡。方法设计并合成了针对端粒酶ＲＮＡ组分的锤头状核酶基因，构建了该核酶基因的体外转录和真核表达质粒，检测了核酶对端粒酶ＲＮＡ组分的体外切割效力和对ＨｅＬａ细胞端粒酶活性的抑制效力。结果该核酶对端粒酶ＲＮＡ组分的体外切割效率达到６０％左右。导入ＨｅＬａ细胞后使端粒酶活性降至原来的１／８～１／１０，细胞生长速度明显变慢，传至１９～２０代时出现９５％凋亡。结论该核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂，在肿瘤基因治疗中发挥作用。
- 屈艺欧阳雪松刘菽秋彭晓东刘柏林
- 关键词：核酶端粒酶HELA细胞肿瘤基因治疗
