陶立 作品数:3 被引量:10 H指数:2 供职机构: 重庆医科大学附属儿童医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家临床重点专科建设项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
儿童原发性肾病综合征尿源干细胞生物学特征研究 被引量:5 2018年 目的:探讨正常儿童尿源干细胞(urine-derived stem cell,USCs)与原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患儿尿源干细胞(p-USCs)生物学特征差异。方法:收集正常儿童及PNS患儿清洁中段尿液,分离培养USCs及p-USCs,观察细胞形态差异;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及干细胞表面标志物(CD24、CD29、CD34、CD73、CD90、CD105、CD146);免疫荧光及Western blot检测细胞肾系标志物(Pax2)表达;Western blot检测细胞自噬水平。结果:PNS患儿尿液中存在2种形态p-USCs:p-USCsⅠ及p-USCsⅡ。p-USCsⅠ形态与正常USCs相似:米粒样、胞体较小、排列紧密。p-USCsⅡ胞体可见少量空泡,胞体较大,散在排列。USCs、p-USCsⅠ及p-USCsⅡ最大传代次数分别为11代、8代及5代。与USCs比较,p-USCs增殖能力减弱,且p-USCsⅡ减弱更加明显(F=217.300,P=0.000);p-USCs细胞凋亡无明显差异;p-USCs干细胞表面标志物及周细胞表面标志物表达无统计学差异;p-USCs肾系标志物表达水平下降,且p-USCsⅡ下降更明显(F=26.930,P=0.001);p-USCs自噬水平下降,差异有统计学意义(F=15.060,P=0.000)。结论:PNS患儿体内存在2种不同形态尿源干细胞:pUSCsⅠ及p-USCsⅡ。与USCs相比,p-USCs形态有差异、自我更新能力降低、肾系标志物表达下降、自噬水平减弱。 李昊 石冬梅 张元原 龚梦佳 阳海平 陶立 王墨 李秋关键词:自噬 糖尿病肾病患者尿源性干细胞的分离鉴定及与健康人尿源性干细胞的细胞生物学比较研究 被引量:4 2018年 干细胞移植是糖尿病肾病新的治疗途径,但异种干细胞存在伦理及免疫排斥等问题。该研究从糖尿病肾病患者尿液中提取出一种类似干细胞的细胞,称之为糖尿病病人尿源性干细胞(USCs from patients with diabetic nephropathy,D-USCs),并比较了与健康人尿源性干细胞(urine derived stem cells,USCs)生物学特性的差异。通过观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物,茜素红及油红O染色分别检测成骨和成脂分化潜能,以鉴定其干细胞特性。通过绘制生长曲线比较D-USCs与USCs增殖能力,人促血管生成因子检测试剂盒检测细胞外分泌因子的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率的差异。结果表明,此类细胞可以在体外分离培养,连续传代生长,细胞形态保持米粒状,表达间充质干细胞标志物(包括CD 24、CD 29、CD 73、CD 90、CD 105)、周细胞标志物(CD 146),不表达造血干细胞标志物(包括CD 31、CD 34、CD 45),具有成骨和成脂分化的潜能。与USCs相比,D-USCs的增殖能力受到损伤,分泌因子种类基本保持一致,但数量上有所减少,细胞凋亡率升高。综上所述,该研究成功从糖尿病肾病病人尿液中提取出尿源性干细胞,为干细胞移植治疗肾损害提供了可能的新的细胞来源,避免了异体免疫排斥反应。 陶立 马文军 龚梦嘉 毕杨 魏光辉 张元原关键词:糖尿病肾病 外分泌 持续低氧预处理促进兔尿源性干细胞增殖和减少凋亡 被引量:2 2017年 目的探讨持续低氧(3%O_2)环境对兔尿源性干细胞(r USCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响。方法 r USCs分别置于3%O2和20%O_2条件下培养,连续观察其形态学变化,绘制细胞增殖曲线;检测其分泌、周期及凋亡变化。结果 r USCs原代培养约第6天便可见单个"米粒样"细胞,不同氧浓度培养后发现常氧组细胞为"长梭形",低氧组向"鹅卵石"样改变;两组细胞增殖曲线均呈"S"形,但低氧组增殖速度较快(P<0.01);低氧组较常氧组相比,血管营养因子表达量均有上调且表达因子种类增加;常氧组G0/G1期细胞数为91.73%±1.35%,明显高于低氧组的71.82%±8.86%(P<0.05);常氧组S期细胞数为3.48%±0.73%,显著低于低氧组的18.77%±3.87%(P<0.01);流式常氧组凋亡率为3.24%±0.38%,明显高于低氧组的0.43%±0.05%(P<0.001);Hoechst结果常氧组凋亡率为4.27%±0.48%,明显高于低氧组的1.37%±0.33%(P<0.01)。结论持续性低氧(3%O2)环境可促进r USCs细胞的增殖,减少细胞凋亡,增加其分泌功能。 马文军 储加强 陶立 龚梦嘉 毕杨 魏光辉 张元原关键词:低氧 增殖 凋亡