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缺氧对人真皮成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化的影响及其机制被引量：2: 2017年; 目的探讨缺氧对人真皮Fh向肌Fh表型转化的影响及其机制。方法取对数生长期第3代健康成人真皮Fb，用含体积分数10％FBS的DMEM培养基培养，进行以下5项实验。（1）实验1、2、3均将所取细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组，每组10皿。常氧组细胞于含体积分数21％氧气环境中培养，缺氧组细胞于含体积分数1％氧气环境中培养。培养0、48h，2组分别取5皿细胞，实验1用实时荧光定量RT—PCR法检测细胞中肌Fh标志物α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达，实验2用蛋白质印迹法检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达，实验3用蛋白质印迹法检测细胞中NF-κB蛋白表达。（2）实验4将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组，每组5皿。前2组细胞同实验1处理，缺氧＋PDTC组细胞同缺氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中NF—κB蛋白表达。（3）实验5将细胞按随机数字表法分为常氧组、缺氧组、缺氧＋PDTC组、常氧＋PDTC组，每组5皿。前3组细胞均同实验4处理，常氧＋PDTC组细胞同常氧组细胞处理并在培养基中加入4mL终物质的量浓度为10μmol／LPDTC。培养48h，蛋白质印迹法检测各组细胞中α—SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD—t检验。结果（1）与常氧组相应时相点比较，缺氧组Fb培养0h时α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及NF-κB蛋白表达量均无明显变化（t值为-1．21～2．04，P值均大于0．05），培养48h时α—SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达量以及NF—κB蛋白表达量均显著升高（t值为-12．57～-3．44，P值均小于0．01）。（2）培养48h，缺氧组Fh中NF—κB�; 赵彬韩夫张伟王许杰张健杨芳芳石继红苏琳琳胡大海; 关键词：缺氧成纤维细胞肌成纤维细胞表型转化

人羊膜上皮干细胞来源外泌体对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响被引量：7: 2017年; 目的探讨人羊膜上皮干细胞来源外泌体对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法（1）取笔者单位妇产科5名足月分娩孕妇的羊膜组织，采用胰蛋白酶消化法分离人羊膜上皮干细胞并观察细胞形态；取第3代细胞，用罗丹明标记的鬼笔环肽染色，观察细胞骨架；另取第3代细胞，采用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD31、CD34、CD90、CD105、SSEA3、SSEA4和免疫相关标志物人白细胞抗原DR位点（HLA－DR）的表达；另取第3代细胞，进行成脂、成骨诱导分化鉴定。（2）取第3代人羊膜上皮干细胞，用含体积分数10%无外泌体FBS的DMEM培养基培养，超速离心法从细胞培养上清液中提取人羊膜上皮干细胞来源外泌体，用扫描电镜观察其形态。（3）取6只成年SD大鼠，于每只大鼠背部制备4个面积为1 cm×1 cm的全层皮肤缺损创面，按随机数字表法将每只大鼠创面分为对照组及25、50、100 μg/mL外泌体组（每组6个创面），分别于创面四周皮下多点均匀注射总体积100 μL的PBS及25、50、100 μg/mL人羊膜上皮干细胞来源外泌体。伤后7、14、21 d，观察创面愈合情况计算创面愈合率。伤后21 d，取各组创面愈合组织，HE染色，观察计数皮肤附件；Masson染色，观察胶原纤维排列。对数据行重复测量方差分析、随机区组方差分析、单因素方差分析及Bonferroni检验。结果（1）分离培养的细胞呈典型的鹅卵石样，细胞表面分布较多微绒毛；细胞CD29、CD90、SSEA3、SSEA4阳性表达率高于50.0%，CD105阳性表达率为8.0%，CD31、CD34和HLA－DR阳性表达率几乎为0；细胞经诱导后可分化为脂肪细胞和成骨细胞。综上，培养细胞鉴定为人羊膜上皮干细胞。（2）人羊膜上皮干细胞来源外泌体为直径50～150 nm的圆形或椭圆形囊泡。（3）伤后7、21 d，各组创面愈合率相近（P值均大于0.05）。伤后14 d，50、100 μg/mL; 赵彬吴高峰张熠杰张伟杨芳芳肖丹曾凯旋石继红苏琳琳胡大海; 关键词：羊膜干细胞外泌体

缺氧通过NF-κb信号通路促进人真皮成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化: 观察缺氧对人皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化的影响和机制,探讨缺氧在皮肤增生性瘢痕发病机制中的作用.结果表明：缺氧通过NF-κb信号通路促进人真皮成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化，缺氧与皮肤增生性瘢痕的形成密切相关。; 赵彬韩夫张伟王许杰张健杨芳芳石继红苏琳琳胡大海; 关键词：增生性瘢痕人真皮成纤维细胞肌成纤维细胞 NF-ΚB信号通路

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杨芳芳

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