- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定被引量：2
- 2023年
- 旨在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3蛋白单克隆抗体及解析其抗原表位。本研究构建了PRRSV类NADC30毒株FJ1402的GP3大肠杆菌表达质粒,制备获得重组GP3蛋白。经过免疫BALB/c小鼠和间接ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞。利用间接免疫荧光试验和蛋白印迹鉴定单克隆抗体特异性。通过构建GP3蛋白基因截短体和合成多肽ELISA鉴定单克隆抗体识别的表位区域。结果显示,成功筛选了7株稳定分泌GP3蛋白抗体的杂交瘤细胞株,7株单克隆抗体均可与PRRSV FJ1402产生特异性反应。鉴定出GP3蛋白4个抗原表位,分别为^(55)PLCPTRQAAAEILE^(68)、^(69)PGKSFWCRI^(77)、^(78)GHDRCSESDH^(87)和^(88)DELGFMVPPGLSS^(100)。2E12单抗与FJ1402、BB0907和S1三个谱系毒株均可发生IFA和Western blot特异反应,4H9、9F3和6B3单抗只与FJ1402毒株反应,而不与BB0907和S1毒株反应。本研究研制成功7株GP3蛋白单克隆抗体,并鉴定出4个GP3蛋白抗原表位,为PRRSV检测和GP3蛋白功能研究提供了重要工具。
- 袁丽孙杨杨张路捷张杰孙海凤白娟姜平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体抗原表位
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫保护蛋白杂合基因、重组杆状病毒及疫苗
- 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫保护蛋白杂合基因、重组杆状病毒及疫苗。成功构建了2株可溶性表达PRRSV GP5和M蛋白基因的重组杆状病毒BMP541与FMP542，制备的重组蛋白可以形成病毒样颗粒，诱导仔猪产生体...
- 姜平尹园英白娟姜辰龙孙杨杨
- 文献传递
- 一种多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶的检测方法
- 本发明属于分析化学技术领域，涉及一种多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的检测方法及其应用。本发明主要是利用经典巯基自组装的方式将能够与PARP特异结合的单链DNA(c-kit-1)修饰于金电极表面，经处理使c-kit-...
- 许媛媛孙杨杨卢辰赫
- 文献传递
- 猪IL-1β单克隆抗体制备及其抗炎症反应活性
- 2025年
- IL-1β可介导炎症病理,阻断IL-1活性具有重要抗炎治疗作用。本研究通过构建猪IL-1β原核表达质粒,进行大肠杆菌表达和蛋白纯化,制备重组蛋白。采用细胞杂交瘤技术制备获得4株稳定分泌IL-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E2、2H3、5H3及7E7);4株单抗腹水ELISA效价高达1∶1024000;5H3单抗识别的抗原表位为149 DLKREVVFCM 158;1E2、2H3和7E7单抗所识别的抗原表位为202 KRYPKRD 208。脂多糖(LPS)小鼠炎症模型抗炎试验结果显示,相对LPS对照组,IL-1β单抗处理组小鼠血清NO、TNF-α、IL-6和IL-1β含量及临床症状评分显著降低,表明4株单抗均有较好抗炎效果,其中1E2单抗抗炎作用最优,为猪IL-1β阻断药物研究奠定了重要基础。
- 李璠孙海凤孙萌高雁怩孙杨杨张路捷白娟姜平
- 关键词：IL-1Β单克隆抗体炎症治疗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫保护蛋白杂合基因、重组杆状病毒及疫苗
- 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫保护蛋白杂合基因、重组杆状病毒及疫苗。成功构建了2株可溶性表达PRRSV GP5和M蛋白基因的重组杆状病毒BMP541与FMP542，制备的重组蛋白可以形成病毒样颗粒，诱导仔猪产生体...
- 姜平尹园英白娟姜辰龙孙杨杨
- 一种多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶的检测方法
- 本发明属于分析化学技术领域，涉及一种多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的检测方法及其应用。本发明主要是利用经典巯基自组装的方式将能够与PARP特异结合的单链DNA(c‑kit‑1)修饰于金电极表面，经处理使c‑kit‑...
- 许媛媛苗晋锋张源淑邵营格孙杨杨卢辰赫
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒谱系8毒株特异性单克隆抗体研制
- 2025年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株存在多种基因亚型(谱系)和抗原性差异,为了鉴别不同谱系流行毒株,选取PRRSV谱系8毒株BB0907(高致病性毒株)非结构蛋白2(NSP2)高变区基因片段(tNSP2),采用大肠杆菌表达制备获得NSP2重组蛋白,并免疫BALB/c小鼠。结果:研制出5株NSP2单克隆抗体(3D6、6B2、6C3、8C2和8H6),小鼠腹水ELISA抗体效价均达1∶216000;5株单抗轻链类型都为Kappa型,3D6、6B2和6C8的重链类型为IgG1,8C2的重链类型为IgG2b,8H6重链类型为IgG2a;通过构建tNSP2蛋白截短体,Western blot鉴定出4个抗原表位,即^(485)GPLNFPTPSE^(494)、^(555)FPLAPSQNMG564、575EVLSEISDIL^(584)和^(585)NDTPAPVS^(593);间接免疫荧光试验结果显示,这些单抗均能与PRRSV谱系8毒株发生特异性反应,但与谱系1和谱系5毒株不反应。本研究为PRRSV分离毒株抗原鉴别诊断和生物学研究提供了有意义的研究材料。
- 任语馨张杰高雁怩孙杨杨张路捷白娟姜平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2单克隆抗体B细胞表位
- 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒重组纳米颗粒疫苗及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒重组纳米颗粒疫苗及其制备方法和应用，该疫苗中包含一种重组纳米颗粒蛋白，该蛋白包括：(1)基于PRRSV结构蛋白表位设计的重组蛋白；(2)基于细菌来源的铁蛋白设计的纳米颗粒蛋白；(3)...
- 姜平孙杨杨白娟高雁怩孙海凤
- 一种卡那霉素残留的可视检测方法
- 一种基于适体的卡那霉素残留的可视化检测方法及应用，属于分析化学领域，主要基于卡那霉素的保护机制和核酸适体的选择机制。保护机制是利用银纳米大的比表面积将卡那霉素吸附于银纳米表面，加入高浓度氯化钠，银纳米在404nm有吸收峰...
- 许媛媛卢辰赫孙杨杨
- 文献传递
- 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒mRNA分子及其应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒mRNA分子及其应用，通过将NADC30‑like的PRRSV FJ1402毒株结构蛋白GP2a、GP3、GP4和GP5基因进行组合，设计了四种mRNA疫苗GP35m‑LNP、GP4...
- 姜平周昊然白娟高雁怩孙海凤费中杰孙杨杨苏潼键
