陈建武
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：湖北省农业科学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 猪肌抑素基因编辑位点864‑883及其应用
- 本发明公开了猪基因组中猪肌抑素基因编辑位点864‑883及其应用，属生物工程领域。本发明从猪肌抑素基因编码区中分离出1个基因编辑靶位点，其序列为5’‑GGATTTTGAAGCTTTTGGATGGG‑3’，位于MSTN编码...
- 毕延震刘西梅郑新民李奎任红艳唐中林张立苹陈建武华文君华再东李莉肖红卫
- 猪肌抑素基因编辑位点864-883及其应用
- 本发明公开了猪基因组中猪肌抑素基因编辑位点864‑883及其应用，属生物工程领域。本发明从猪肌抑素基因编码区中分离出1个基因编辑靶位点，其序列为5’‑GGATTTTGAAGCTTTTGGATGGG‑3’，位于MSTN编码...
- 毕延震刘西梅郑新民李奎任红艳唐中林张立苹陈建武华文君华再东李莉肖红卫
- 文献传递
- CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建猪肌抑素基因敲除细胞系被引量：4
- 2016年
- 肌抑素是肌肉增生的负调控因子,为改良家畜产肉性状的重要候选基因。本研究设计了Cas9/sgRNA表达载体与供体DNA,通过电转染方法将其导入猪PK15细胞,经G418抗性筛选和荧光蛋白标记甄别,筛选到带阳性标记的细胞克隆。通过跨界PCR、长距离PCR、Western印迹、Southern印迹及PCR产物测序,证明了猪肌抑素的第3外显子序列特异性同源重组事件的发生。在猪肌抑素的第3外显子区域找到了1个有效的CRISPR/Cas9打靶位点,带阳性标记的细胞克隆经过多次筛选分离,获得了肌抑素单等位基因失活的稳定细胞系,为深入研究肌抑素的功能提供了重要的实验材料。
- 綦世金华再东刘西梅华文君郑新民陈祥李太山陈建武李奎唐中林毕延震陈彬
- 关键词：同源重组
- 一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略被引量：1
- 2017年
- 同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具。但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰。因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要。研究基于"双荧光"的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略。该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记。经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测。研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶。在选取的T1和T2两个靶位点处,"双荧光"策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5%和86.7%,筛选效率得到显著提高。研究建立的"双荧光"可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景。
- 陈建武任红艳华文君刘西梅綦世金周黎欧阳艳毕延震杨烨郑新民
- 关键词：基因打靶同源重组
