张慧文
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：南京市科技发展计划项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 曲谷抑霉素A调控人干扰素调节因子3基因初步研究
- 2017年
- 目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)曲谷抑霉素A(trichostain A,TSA)对人干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)基因表达的影响,初步分析TSA调控IRF3基因的乙酰化机制。方法:双荧光素酶活性分析法检测TSA和组蛋白乙酰化酶(histone acetylase,HAT)野生型p300对IRF3基因启动子活性的影响;实时荧光定量PCR检测TSA对IRF-3基因m RNA水平的影响;Western blot检测TSA对IRF3蛋白水平的影响。结果:不同浓度TSA干预后IRF3基因启动子活性均增加,TSA浓度为1μmol/L时,PS1、PS6相对荧光素酶活性分别增加75%、155%;过表达野生型p300后PS1相对荧光素酶活性增加267%;TSA(1、10μmol/L)干预细胞6 h后,IRF3基因m RNA水平增加23%、39%,干预24h后,m RNA水平增加17%、64%;TSA(0.1、1、5μmol/L)干预细胞24 h后,蛋白表达量分别增加15%、72%、191%。结论:TSA上调IRF3基因m RNA和蛋白表达,TSA和组蛋白乙酰化酶p300均可正向调控IRF3基因启动子活性,TSA可能通过IRF3通路发挥治疗免疫性疾病和抗肿瘤作用。
- 张慧文周国平
- 关键词：乙酰化P300基因转录调控
- CD2相关蛋白剪接异构体启动子区及其缺失体的构建和活性分析
- 2016年
- 目的:构建CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)剪接异构体启动子区及其缺失体,转染HEK293及He La细胞,评价其启动子活性。方法:取稳定生长的He La细胞,常规方法提取总RNA,逆转录为c DNA并以此为模板,PCR扩增CD2AP剪接异构体之一CD2AP002转录起始位点上游2 200 bp的启动子区域片段,亚克隆这些片段至p GL-3基本载体上的多个克隆位点,构建含CD2AP002启动子的重组质粒。CD2AP002质粒构建成功后,以此质粒为模板重复上述步骤构建一系列CD2AP002启动子5′侧翼区缺失体。重组质粒及其缺失体转染人胚肾HEK293细胞及人宫颈癌He La细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的活性。结果:酶切、核酸序列分析证实,成功构建含CD2AP002启动子的重组质粒及其缺失体。经双荧光素酶活性检测证实不同片段大小的5′侧翼区序列缺失体均具有与片段长度相应的活性。结论:成功构建出在HEK293及He La细胞中具有活性的重组质粒及其缺失体。
- 李楠楠王璐璐张慧文金蕊周国平
- 关键词：CD2相关蛋白启动子剪接异构体
- 启动子甲基化调控ORMDL3基因转录表达的初步研究
- 张慧文吴晓露庄丽丽周国平
