郭珍珍
- 作品数：17 被引量：24H指数：3
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生理学轻工技术与工程更多>>
- 猪源铁蛋白重链亚基纳米粒的制备被引量：3
- 2018年
- 根据Gen Bank公布的铁蛋白重链基因序列,设计出1对特异性引物;提取猪心脏总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白重链亚基基因片段,经测序正确后,再将双酶切的纯化产物与PET32a原核表达载体相连接,构建重组质粒、把测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。将表达的重组蛋白用Ni^+离子亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物。将鉴定正确的铁蛋白产物置于透射电镜下观察其表征,以进一步鉴定铁蛋白纳米颗粒是否自组装成功。结果表明,本研究成功表达并纯化出了猪源铁蛋白重链亚基,而透射电镜下观察到了大量直径为10~13 nm的颗粒,说明重组猪源铁蛋白重链纳米粒自组装成功。
- 李滨洲和春昊吴秋玲郭珍珍张留君杨国宇王亚宾陈丽颖
- 关键词：铁蛋白纳米粒免疫佐剂
- 猪博卡病毒3/4/5型PCR检测方法的建立及应用被引量：2
- 2016年
- 通过分析GenBank上登录的猪博卡病毒3/4/5型(PBoV3/4/5型)基因序列,发现这些基因序列中存在一段高度同源性保守序列,针对该序列设计并合成1对引物,成功建立了可同时扩增出PBoV 3/4/5型的PCR检测方法。对2013年8月至2014年5月河南省50份临床腹泻仔猪小肠样品进行检测,结果 21份为PBoV阳性,阳性率为42%,表明PBoV在河南省猪群中存在一定流行。本试验建立的PCR方法对PBoV3/4/5的检测具有简便、快速、灵敏度高和特异性强的特点,为PBoV 3/4/5型的快速检测提供了有效的技术支持。
- 付朋飞杨兴武乔涵潘鑫龙郭晓庆张宇郭珍珍陈红英
- 关键词：PCR
- 携肠球菌Ace抗原的铁蛋白纳米粒制备与免疫效果检测被引量：1
- 2020年
- 为制备携肠球菌胶原蛋白黏附素Ace抗原表位的铁蛋白纳米颗粒,并评价其免疫效果,利用生物信息学软件预测Ace抗原表位,合成相应的基因片段,分别构建含有相应抗原表位基因与铁蛋白H亚基基因的融合表达载体,同时构建融合表达Ace蛋白和H亚基的质粒pET-32a-ace-H,分别转入大肠杆菌中进行融合表达。利用Western blot鉴定各重组融合蛋白的反应原性,并利用透射电镜观察目的蛋白表征。用重组铁蛋白纳米颗粒分别制备免疫原进行家兔接种试验,并定期检测家兔血清特异性抗体水平。结果显示,正确构建了6个Ace蛋白抗原表位基因与H亚基基因的融合表达载体pET-32a-ace1-H^pET-32a-ace6-H,其中pET-32a-ace1-H、pET-32a-ace3-H、pET-32a-ace5-H和pET-32a-ace6-H为可溶性表达载体。Western blot检测显示可溶性表达的4种融合蛋白均具有较好的反应原性。透射电镜图像显示,4种融合蛋白均形成了具有中空结构的铁蛋白纳米笼,其直径与天然铁蛋白类似;而融合蛋白Ace-H纳米笼没有中空结构,且直径比天然铁蛋白大。家兔免疫试验结果显示,6种融合蛋白均在家兔体内诱导产生了特异性抗体,而且,携带单个Ace表位的铁蛋白纳米颗粒Ace1-H、Ace3-H、Ace5-H与携带多表位的Ace重组蛋白以及Ace-H纳米颗粒相比,其诱导的抗体效价和消长规律均一致,其中以铁蛋白纳米粒Ace5-H的免疫效果为最佳。本研究结果表明铁蛋白纳米颗粒能有效增强蛋白质抗原的免疫原性,有望作为候选表位疫苗佐剂得到应用。
- 和春昊金钺张晨昕郭珍珍李滨洲吴秋玲王亚宾陈丽颖
- 关键词：铁蛋白表位疫苗
- 胆固醇25羟化酶抑制猪伪狂犬病毒复制的研究
- 胆固醇 25 羟化酶(Cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)是一种干扰素(Interferon,IFN)刺激因子,且CH25H基因受干扰素调控.CH25H通过在胆固醇的第 25 位碳原子上加入...
- 曾磊王江褚贝贝张莉郭珍珍杨国宇
- 关键词：伪狂犬病毒
- 动物源性粪肠球菌Ebp菌毛亚单位蛋白多抗的制备及其对生物被膜形成的影响
- 2020年
- 目的研究制备动物源粪肠球菌Ebp菌毛亚单位蛋白多克隆抗体及其可能的免疫学作用。方法运用生物信息学软件对粪肠球菌菌毛EbpA、EbpB和EbpC蛋白的抗原表位进行预测,发现6个抗原表位,将其构建重组质粒,表达、纯化,免疫新西兰大白兔后获得了6个菌毛亚单位多克隆抗体,再进行抗体特异性和生物膜阻断分析。结果6个菌毛亚单位重组蛋白与预测的分子量相符,均对新西兰大白兔具有免疫原性,EbpA1、EbpA2、EbpA3、EbpB1、EbpC1和EbpC2亚单位蛋白多克隆抗体效价经双向免疫琼脂扩散实验检测分别达到1∶16、1∶8、1∶32、1∶32、1∶64和1∶64。经WB检测和生物膜阻断试验,6个多克隆抗体均具有抗原特异性和野生菌株生物膜阻断作用,而且以EbpA1、EbpC1和EbpA3的生物膜阻断作用最强。结论粪肠球菌EbpA1、EbpC1和EbpA3亚单位蛋白可能为粪肠球菌免疫预防和治疗奠定基础。
- 郭珍珍张留君楚红燕王鑫盛董家君王亚宾陈丽颖
- 关键词：粪肠球菌
- TGEV持续感染增强粪肠球菌对IPEC--J2细胞的侵袭能力
- 传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)是一种导致以腹泻和高发病率为临床特征的冠状病毒，TGEV可引起小于2周龄的仔猪严重腹泻和脱水，其死亡率高达100％。所有...
- 郭珍珍
- 关键词：传染性胃肠炎病毒粪肠球菌肠上皮细胞
- 猪cripto促进C2C12细胞分化
- 2018年
- 应用分子生物学方法、荧光显微镜和实时荧光定量PCR技术，对cripto基因进行克隆、真核表达载体的构建，探讨cripto对C2C12细胞生长增殖的影响和肌细胞分化相关基因MyoD、MyoG、P21、MHC的表达变化。结果显示，phiC31cripto真核表达载体构建成功，荧光显微镜下可见转染phiC31载体和（ripto基因共转染的C2C12细胞表达强烈的绿色荧光，且对细胞的生长增殖无显著性影响；Q_PCR检测MyoD、MyoG、P21、MHC结果证实，猪cripto可以促进细胞分化因子MyoD、MyoG、P21、MHC的表达。结果表明，本试验成功地构建了C2C12-phiC31fripto过表达细胞系，Q—PCR结果分析发现cripto基因可以促进肌肉分化，为进一步探索cripto基因在肌肉分化中的分子机制提供理论依据。
- 樊爽爽张雪梅郭珍珍曾磊鲁绍芳鲁维飞韩立强褚贝贝杨国宇王江
- 关键词：基因克隆C2C12细胞真核表达细胞分化
- 生鲜肉肠道病原菌检验中HE和EMB培养基上干扰菌的分离鉴定
- 【目的】在对生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门氏菌的常规检验中,常用肠道菌培养基HE和EMB琼脂平板上常会出现一些生长良好、菌落特性与目的菌高度相似的可疑菌。因此,有必要通过多种方法进行鉴别/鉴定,以排除其对目标菌株检测的干扰。【...
- 李滨洲陈飞何春昊郭珍珍吴秋玲金钺王亚宾陈丽颖
- 关键词：生鲜肉飞行时间质谱条件致病菌肠道病原菌
- 文献传递
- 猴源rab基因shRNA文库及其稳定细胞株的构建
- 2018年
- 为揭示Rab蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）入侵进入宿主细胞后的功能,本研究以PRRSV易感的猴胚胎肾上皮细胞Marc-145为模型,构建了针对猴源rab基因的短发夹RNA（shRNA）文库。此文库中的shRNA以pLKO.1为载体质粒,与pMD2.G和psPAX2包装质粒共同转染HEK293T/17细胞,获得慢病毒;利用慢病毒感染Marc-145,通过puromycin筛选获得稳定抑制猴源rab基因表达的细胞株。通过荧光定量PCR方法检测各细胞株中rab基因的敲减效率。本试验构建的文库包含187个克隆、涉及62种rab基因。荧光定量PCR结果证明,筛选出的稳定细胞株中相应rab基因mRNA的表达量均有显著下降。结果显示本试验成功构建了猴源rab基因shRNA文库并筛选出了稳定细胞株,可用于后续进一步研究Rab蛋白在PRRSV生活周期中发挥的重要功能。
- 郭珍珍鲁绍芳樊爽爽李国利韩立强鲁维飞王江陈丽颖杨国宇褚贝贝
- 关键词：PRRSV慢病毒MARC-145细胞稳定细胞系
- 粗提牛白细胞抗菌肽对冷藏肉的抑菌效果观察
- 2016年
- 为探讨粗提牛白细胞抗菌肽对冷藏肉的抑菌效果,通过牛白细胞粗提抗菌肽的制备、粗提抗菌肽的抑菌活性测定与最小抑菌浓度(MIC)测定、生鲜猪肉冷藏期间菌落总数的变化测定和抗菌肽对冷藏肉保鲜效果的观测,对添加粗提抗菌肽的生鲜猪肉在冷藏期间菌落总数的变化进行了研究。结果显示,牛白细胞抗菌肽对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)均具有明显的抑菌活性;粗提抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC均是0.619μg·μL^(-1);生鲜猪肉样品在冷藏过程中的自身菌落变化规律是前期保持细菌正常钟形生长曲线,随着冷藏时间的延长,嗜冷细菌逐渐适应开始另一段生长趋势;在表面喷洒粗提抗菌肽后108 h内,冷藏肉的感官指标明显优于对照组,其菌落总数也比对照组有显著降低(P<0.05),抑菌率维持在60%~99%,效果最高时可达99%。研究结果表明粗提牛白细胞抗菌肽可以有效抑制冷藏肉中的细菌增殖,可延长冷藏肉的保存期限,具有良好抑菌效果。
- 朱文明潘旭辉郭珍珍王亚宾胡慧陈丽颖
- 关键词：白细胞抗菌肽抑菌效果防腐保鲜
